Sciencell公司的人臍靜脈內皮細胞（貨號#8000、HUVEC）是科研實驗中常用到的內皮細胞，當人臍靜脈內皮細胞達到80-90%融合時，需要對人臍靜脈內皮細胞進行傳代培養。

傳代培養方法：

1.準備培養瓶：用纖維粘連蛋白（貨號#8248、BPF）以2ug/cm2包被培養瓶，包被時間為37度一小時或4度過夜。將培養基（貨號#1001、ECM）、胰酶中和液（貨號#0113、TNS）、胰酶/EDTA消化液（貨號#0103、T/S）和無鈣鎂離子的磷酸鹽緩沖液（貨號#0303、DPBS），溫度恢復至室溫，我們不推薦用37°C水浴加熱試劑和培養基。
2.胰酶消化：棄去原培養瓶中培養基，用10mlDPBS沖洗人臍靜脈內皮細胞，然后加入2ml胰酶消化液。輕輕搖晃培養瓶以至胰酶消化液覆蓋所有人臍靜脈內皮細胞。如果使用ScienCell實驗室的胰酶/EDTA消化液，會把胰酶消化對臍靜脈內皮細胞的損害減少到最低。

3.終止消化：將培養瓶放入37度培養箱中1-2分鐘，在孵化后期，輕輕拍打培養瓶以使臍靜脈內皮細胞脫離瓶壁。顯微鏡下觀察臍靜脈內皮細胞形態變化，直至80%臍靜脈內皮細胞變圓。然后立即加入10ml胰酶中和液并輕輕搖動培養瓶。

4.細胞收集：收集人臍靜脈內皮細胞并將其轉入50ml離心管中。再加入10ml培養基沖洗培養瓶以確保收集所有的殘余臍靜脈內皮細胞。在顯微鏡下觀察培養瓶中剩余臍靜脈內皮細胞的數量以確定是否將臍靜脈內皮細胞大部分收集，剩余臍靜脈內皮細胞數應小于5%。

5.離心重懸：以1000轉/分（1000rpm)離心收取的臍靜脈內皮細胞5分鐘，棄去上清，在新加的培養基中重懸臍靜脈內皮細胞。

6.鋪板培養：對臍靜脈內皮細胞計數，然后將它們接種到新的纖維粘連蛋白包被過的培養瓶中，37度培養即可。電話13683626447