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EGFP-LC3穩轉細胞株構建服務
質粒來源:Addgene #11546 ( 載體pEGFP-C3; 插入基因 human LC3B,NM_022818 )
背景:自噬為機體在亞細胞水平的“自我吞噬”,可以幫助細胞維持自身穩態及適應應激環境。近年來,自噬已成為生物學領域中的一個研究熱點。迄今研究發現,自噬可以參與多種疾病的發生發展,例如腫瘤,心血管疾病,神經退行性疾病等。因而,自噬在各類相關疾病研究中作為藥物篩選靶點越來越受關注和討論。自噬研究的基礎是有效地觀察,定量細胞中自噬的發生。而目前應用較為廣泛的自噬檢測方法為觀察GFP-LC3熒光斑,細胞正常生理環境LC3呈彌散狀分布,自噬激活時LC3會轉移至自噬囊泡上,因此,GFP熒光的彌散或斑點狀聚集可以比較準確的反應細胞狀態。
優點:EGFP-LC3穩轉細胞株可以穩定持續的表達EGFP-LC3,能夠有效地解決瞬轉實驗的效率低,周期長,操作繁瑣,不穩定等問題,有利于保證實驗結果穩定性與可重復性。
案例:MCF-7/EGFP-LC3
參考文獻: