K562/Paclitaxel_人白血病紫杉醇耐藥株
產(chǎn)品信息
細(xì)胞名稱：K562/Paclitaxel_人白血病紫杉醇耐藥株
貨號(hào)    ：SNB-DR-0002
種屬來(lái)源：人源
性別年齡：女，53歲
種屬來(lái)源：骨髓
生長(zhǎng)特性：懸浮生長(zhǎng)
細(xì)胞形態(tài)：淋巴母細(xì)胞
細(xì)胞規(guī)格：1 X 10⁶cells/T25或1 mL凍存管
培養(yǎng)條件：RPMI1640 Medium + 10%FBS + 92.07nM Paclitaxel
凍存條件：90% FBS + 10% DMSO
傳代方法：1:3傳代, 2-3天傳1代
RIF:       119.19
細(xì)胞培養(yǎng)操作
干冰運(yùn)輸：收到細(xì)胞后需立即轉(zhuǎn)入液氮保存、或者-80°C冰箱短期凍存、或者直接復(fù)蘇
常溫運(yùn)輸：收到細(xì)胞后，請(qǐng)立即將細(xì)胞培養(yǎng)瓶從包裝盒中取出，并按照下方操作步驟進(jìn)行培養(yǎng)傳代
細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)80% - 90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)
 
培養(yǎng)瓶中細(xì)胞操作步驟
對(duì)于懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞，寄送前，我們會(huì)將培養(yǎng)基充滿整個(gè)培養(yǎng)瓶，以減少產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中細(xì)胞所受震蕩。
1. 收到細(xì)胞產(chǎn)品后，請(qǐng)注意觀察是否有污染。將培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下仔細(xì)檢查是否渾濁、是否細(xì)菌污染。
2. 將培養(yǎng)瓶豎直放置于37℃培養(yǎng)箱中直至溫度平衡，隨后，在生物安全柜中，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞至離心管中，離心200×g / 5 -10 min，去除上清后，用5mL培養(yǎng)基吹散細(xì)胞。
3. 對(duì)上述細(xì)胞懸液進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)及活力檢測(cè)，調(diào)整細(xì)胞密度至2-3×105 cells/mL，并轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中。
4. 將培養(yǎng)瓶豎直放置于含有5% CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。如果細(xì)胞達(dá)到傳代培養(yǎng)的密度，則進(jìn)行傳代培養(yǎng)
凍存管細(xì)胞操作步驟
注意： 為保證細(xì)胞的高活率，請(qǐng)收到產(chǎn)品后，立即解凍培養(yǎng)。
1. 將凍存管置于37℃ 水浴中來(lái)回晃動(dòng)，迅速解凍。為避免污染，確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速，大約2分鐘。
2. 一旦凍存管中液體融化后，立即取出，采用 70%酒精噴拭凍存管表面。從此步開(kāi)始，后續(xù)操作須在生物安全柜中完成。
3. 將凍存管中的液體轉(zhuǎn)移到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中， 離心200×g / 5 - 10 min，用真空泵去除含有凍存液的上清。
4. 用完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證細(xì)胞復(fù)蘇的存活率，請(qǐng)將培養(yǎng)基在37℃水浴預(yù)熱后使用。
5. 將細(xì)胞置于含有5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
懸浮細(xì)胞傳代培養(yǎng)
懸浮細(xì)胞的傳代可通過(guò)補(bǔ)加或置換新鮮培養(yǎng)基的方式來(lái)完成，具體做法如下：
1. 取出少量細(xì)胞懸液進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)及活力檢測(cè)，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1.5×106 cells/mL 時(shí)，進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。
2. 取足量細(xì)胞加入到盛有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，將細(xì)胞密度維持在5×105cells/mL。
3. 將培養(yǎng)瓶豎直放置于含有5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。如果細(xì)胞達(dá)到傳代培養(yǎng)的密度，則進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
培養(yǎng)基換液: 每隔 2 至 3 天。
注意：培養(yǎng)瓶應(yīng)使用帶濾膜瓶蓋，以保持培養(yǎng)基中的空氣和CO2
注意：耐藥細(xì)胞，需先無(wú)藥培養(yǎng)穩(wěn)定后保種再進(jìn)行加藥培養(yǎng)，按照3次梯度加藥：最大劑量1/4，最大劑量1/2，最大劑量。
細(xì)胞凍存操作
1. 1000rpm離心5分鐘去掉上清。加1 mL血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，    DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度不低于1 x 10⁶/mL，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
2. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80°C冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。