A549/Paclitaxel _人肺癌紫杉醇耐藥株
產品信息
細胞名稱： A549/Paclitaxel _人肺癌紫杉醇耐藥株
貨號    ： SNB-DR-0010
種屬來源： 人
性別年齡： 男性
種屬來源： 肺
生長特性： 貼壁生長
細胞形態： 上皮細胞樣
細胞規格： 1 X 10⁶cells/T25或1 mL凍存管
培養條件： F-12K + 10% fetal bovine serum + 3.768nM Paclitaxel
37 ℃, 5% CO2
凍存條件： 90% FBS + 10% DMSO
傳代方法： 1:3傳代, 2-3天傳1代
RIF:        34.87
細胞培養操作
干冰運輸：收到細胞后需立即轉入液氮保存、或者-80°C冰箱短期凍存、或者直接復蘇
常溫運輸：收到細胞后，請立即將細胞培養瓶從包裝盒中取出，并按照下方操作步驟進行培養傳代
細胞傳代：細胞密度達80% - 90%，即可進行傳代培養
 
培養瓶中細胞操作步驟
 對于貼壁培養的細胞，寄送前，我們會將培養基充滿整個培養瓶，以減少產品運輸過程中貼壁細胞的脫落。

1. 收到細胞后，請注意觀察是否有污染。將培養瓶置于倒置顯微鏡下仔細檢查是否渾濁、是否細菌污染。因為運輸過程中存在顛簸，且有些細胞對溫度變化也很敏感，可能存在一些細胞脫落漂浮的情況，這些細胞仍是活細胞，請勿丟棄，可離心富集后傳代使用。
2. 對于貼壁細胞，在生物安全柜環境中，用真空泵去除培養瓶中多余的培養基，至剩余5-8mL 左右，隨后根據培養基選擇合適的CO2含量的37℃恒溫培養箱中培養，擰松瓶蓋。如果細胞已經長滿培養瓶，請立即傳代。
3. 對于懸浮的細胞，在生物安全柜環境中，轉移培養瓶中的細胞至離心管，150 g 離心 5 分鐘，去除上清后，用5 mL培養基吹散細胞，轉移至新的培養瓶中，隨后置于合適的CO2含量的37℃恒溫培養箱中培養。

 
凍存管細胞操作步驟
注意： 為保證細胞的高活率，請收到產品后，立即解凍培養。

1. 將凍存管置于37℃水浴中來回晃動，迅速解凍。為避免污染，確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速，大約1分鐘。
2. 一旦凍存管中液體融化后，立即取出，采用酒精噴拭凍存管表面。從此步開始，后續操作須在生物安全柜中完成。
3. 將凍存管中的液體轉移到含有5mL完全培養基的離心管中，150 g 離心 5 分鐘，用真空泵去除上清。
4. 用完全培養基重新懸浮細胞并轉移到新的培養瓶中。為保證細胞復蘇的存活率，請將培養基在37℃水浴預熱后使用。
5. 將細胞置于含有合適CO2的37℃恒溫培養箱中培養。

 
貼壁細胞傳代培養

1. 吸取并棄掉培養瓶中培養基，加入PBS潤洗一次。
2. 加入1 mL 0.25 (w/v) Trypsin-EDTA 溶液，并置于37℃培養箱中孵育，直至細胞從壁上脫落分離。此過程大約需要3-5分鐘。
3. 加入2mL完全培養基中和胰蛋白酶，并輕輕吹打將細胞從培養瓶表面吹落，并使細胞分散。
4. 將細胞懸液收集到15mL離心管里，150 g 離心 5 分鐘，用真空泵去除上清。取適量的培養基將細胞重懸，轉移到新的培養瓶中培養。

懸浮細胞傳代可參考以下方法：
 一、直接傳代法
    1、待懸浮細胞長滿至 80%～90%（細胞懸液變黃），即可傳代；
    2、用吸管吸棄細胞懸液 1 / 2~1 / 3；
    3、加入適量的新鮮培養基，繼續培養。
 二、離心傳代法（在發現有細胞碎片的情況下）
    1、將細胞懸液轉移到離心管內；
    2、150 g 離心 5 min，棄去上層清液；
    3、使用新鮮的培養基重懸細胞；
    4、吸管吸取適量細胞懸液，裝入新的培養瓶，再加入適量的新鮮培養基，繼續培養。
 
細胞凍存操作
1. 1000rpm離心5分鐘去掉上清。加1 mL血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO，輕輕混勻，    DMSO終濃度為10%，細胞密度不低于1 x 10⁶/mL，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
2. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80°C冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。