產品簡介：
 谷胱甘肽還原酶檢測試劑盒(Glutathione Reductase Assay Kit)是一種簡單易行的通過紫外比色來檢測細胞、組織或其它樣品中谷胱甘肽還原酶(Glutathione reductase)活性的試劑盒。谷胱甘肽還原酶可以還原氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成還原型谷胱甘肽(GSH)。谷胱甘肽還原酶在許多組織中都有分布，可以維持細胞內充足的還原型谷胱甘肽(GSH)水平。GSH可以清除自由基和一些有機過氧化物，或作為谷胱甘肽氧化酶(Glutathione peroxidase)的底物來清除一些過氧化物。
 谷胱甘肽還原酶可以催化如下反應。


NADPH在340nm有吸收峰，因此可以通過測定A340的減小來計算出谷胱甘肽還原酶(Glutathione reductase，簡稱GR)的活性。
 本試劑盒可以檢測組織勻漿產物、細胞裂解產物等生物樣品中的谷胱甘肽還原酶的活性。一個試劑盒共可以進行100次檢測。
包裝清單：
產品編號 產品名稱 包裝
S0055-1 谷胱甘肽還原酶檢測緩沖液 50ml
S0055-2 樣品稀釋液 50ml
S0055-3 NADPH 4mg
S0055-4 氧化型谷胱甘肽(GSSG) 14.2mg
— 說明書 1份
保存條件：
-20℃保存，半年有效。NADPH溶解后宜-70℃保存，4℃可以保存一天，-20℃保存一周后NADPH會減少10%以上。GSSG在配制成溶液后，適當分裝，-20℃保存。
注意事項：
 本試劑盒檢測時牽涉到氧化還原反應，所有氧化劑或還原劑都會干擾本試劑盒的測定。另外，硫酸鈉、硫酸銨和鐵氰化物都會干擾本試劑盒的測定。請盡量避免。
 樣品可以立即測定，也可以-70℃凍存待以后測定。
 一定要嚴格控制反應時的溫度，否則會引起較多誤差。
 NADPH不太穩定，要嚴格按照后續說明操作，謹防失活。
 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1． 樣品的準備：
a. 細胞樣品的準備。可以用碧云天生產的Western及IP細胞裂解液(P0013)參考相應的說明裂解細胞樣品。
b. 組織樣品的準備。動物用含有1mM EDTA的生理鹽水(0.9% NaCl)灌流清除血液后獲取組織樣品。可以用碧云天生產的Western及IP細胞裂解液參考相應的說明裂解組織樣品。
c. 紅細胞裂解液的準備。用抗凝管收集血液，顛倒混勻。取至少500微升全血4℃ 2500g離心5分鐘。棄上清，沉淀用冰冷的生理鹽水(0.9%氯化鈉)洗滌3次。用約5倍細胞體積的冰冷的去離子水，例如MilliQ純水，重懸細胞沉淀，冰浴10分鐘。4℃，8500g離心10分鐘，取上清。
上述各種樣品測定蛋白濃度后，推薦使用0.1-1mg蛋白測定谷胱甘肽還原酶的活性。如發現樣品中谷胱甘肽還原酶的活力過高，可以用樣品稀釋液進行稀釋。如樣品中谷胱甘肽還原酶的活力過低，則需適當加大蛋白用量。
2． 試劑盒的準備工作：
a. 配制2mM NADPH。取1.5mg NADPH，加入900微升MilliQ級純水或重蒸水，溶解，混勻。預計多余的NADPH須立即分裝，-70℃保存。
b. 在14.2mg GSSG中加入10ml MilliQ級純水，溶解并混勻。預計多余的GSSG須立即分裝，-20℃保存。
c. 所有試劑在使用前均須在水浴中或PCR儀等設備上溫育到25℃。
3． 樣品測定：
表1
空白對照 (blank) 樣品 (sample)
GSSG溶液 100 μl 100 μl
谷胱甘肽還原酶檢測緩沖液 90 μl 70-90 μl
樣品 0 μl 0-20μl
NADPH溶液 (2mM) 10 μl 10 μl
總體積 200 μl 200 μl
a. 參考表1，依次加入各溶液，混勻，在加入10微升NADPH溶液后，谷胱甘肽還原酶催化的反應就開始了。
b. 使用適當的酶標儀或微量紫外分光光度計測定A340。如果儀器可以設置溫度，把溫度設置在25℃，否則可以通過空調調節室溫到25℃，待預計儀器也達到25℃后再開始測定A340。
c. 每隔1分鐘記錄A340值，至少連續記錄5分鐘，獲得5個點的數據。或者如果儀器具備相應功能，可以讓儀器連續測定5分鐘或自動每隔1分鐘測定一次A340。
4． 樣品中谷胱甘肽還原酶酶活力的計算：
a. 為了精確測定谷胱甘肽還原酶的活性，A340每分鐘的變化幅度宜在0.005-0.06A340/分鐘。即相當于樣品測定時的最終活力單位宜在0.8-10mU/ml。如果酶活力過高可以用樣品稀釋液進行適當稀釋，如果酶活力過低，可以設法加大樣品的用量。
b. 谷胱甘肽還原酶酶活力單位的定義：1個酶活力單位(1 unit)在25℃，pH7.5的條件下，在1分鐘內可以還原化1微摩爾GSSG。1 U=1000 mU。
c. 對于谷胱甘肽還原酶：1mU/ml＝1nmol NADPH/min/ml＝(A340/min)/0.00622
即相當于：[檢測體系中谷胱甘肽還原酶活力]=[A340/min(sapmle)－A340/min(blank)]/0.00622
注：[檢測體系中谷胱甘肽還原酶活力]的單位為mU/ml。
d. [樣品中谷胱甘肽還原酶活力]＝[檢測體系中消耗谷胱甘肽還原酶活力] X[稀釋倍數]/[樣品中的蛋白濃度]
[樣品中谷胱甘肽還原酶活力]的單位為：U/mg蛋白或mU/mg蛋白；
[樣品中的蛋白濃度]的單位為：mg/ml。
e. 計算示例：樣品的蛋白濃度經測定為0.5mg/ml，用樣品稀釋液稀釋10倍后，取10微升稀釋后的樣品參考表1進行測定。如果A340/min(sapmle)＝0.0255，A340/min(blank)＝0.0006，那么
[檢測體系中谷胱甘肽還原酶活力]= (0.0255-0.0006)/0.00622=4.0mU/ml
[樣品中谷胱甘肽還原酶活力]= 4.0mU/mlX10X20/(0.5mg/ml)=1.6U/mg(蛋白)
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