產(chǎn)品簡介：

Ø 碧云天生產(chǎn)的磷酸鈣法細胞轉(zhuǎn)染試劑盒(Calcium phosphate cell transfection kit)，簡稱鈣轉(zhuǎn)試劑盒，在傳統(tǒng)的磷酸鈣細

胞轉(zhuǎn)染方法的基礎上進行了改良，提高了轉(zhuǎn)染效率，并降低了毒性。用磷酸鈣法轉(zhuǎn)染細胞，不僅可以瞬時表達，也可以篩選穩(wěn)定
株。
Ø HEK293或HEK293T細胞，即通常所謂的293細胞，是最適合磷酸鈣法轉(zhuǎn)染的細胞之一，優(yōu)化條件后轉(zhuǎn)染效率可以高達90%以上；通
常很容易達到40-50%左右的轉(zhuǎn)染效率。大多數(shù)常見的細胞例如Hela細胞、CHO細胞等也都適合磷酸鈣法轉(zhuǎn)染，但效率比293細胞
要略低一些。
Ø 本試劑盒不僅適合于大多數(shù)貼壁細胞的轉(zhuǎn)染，也適用于一些懸浮細胞的轉(zhuǎn)染。
Ø 本試劑盒提供的試劑都經(jīng)無菌處理，可以直接使用。
Ø 本試劑盒足夠轉(zhuǎn)染不少于200個細胞樣品。



包裝清單：

BBS溶液 20毫升
氯化鈣溶液 20毫升
說明書 1份




保存條件：

-20℃保存，一年有效。



注意事項：

Ø 轉(zhuǎn)染時，把DNA-氯化鈣溶液加入到BBS溶液中，不要把BBS溶液加入到DNA-氯化鈣溶液中。


Ø 高純度的質(zhì)粒是獲得高轉(zhuǎn)染效率的必要條件，要確保A260/A280大于1.8，并且電泳檢測抽提到的質(zhì)粒90％以上都是超螺旋。
Ø 在用磷酸鈣法轉(zhuǎn)染細胞時應使用濃度不高于5%的二氧化碳，二氧化碳的最佳濃度為3%左右。
Ø BBS溶液的pH值直接關(guān)系到轉(zhuǎn)染效率，盡量避免把BBS溶液長時間暴露在空氣中，以免被空氣中的二氧化碳酸化。

Ø 轉(zhuǎn)染時由于質(zhì)粒不同、細胞不同，最佳的質(zhì)粒用量需自行摸索。
Ø 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明：

1.
對于貼壁細胞：


a) 將細胞培養(yǎng)于培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板內(nèi)，通常在鋪板后1-2天內(nèi)長到70-80％滿為宜。后續(xù)說明都按6孔板內(nèi)一個孔進行說明，
如果有更多個孔或大小不相同的培養(yǎng)器皿，請自行換算。
b) 在轉(zhuǎn)染前30-60分鐘，吸去細胞培養(yǎng)液，加入新鮮的不含抗生素的完全培養(yǎng)液2毫升。注意：轉(zhuǎn)染時最好使用新鮮配制且
pH值經(jīng)過精心調(diào)校的培養(yǎng)液；轉(zhuǎn)染用的培養(yǎng)液可以在配制后分裝凍存，使用時再解凍。
c) 取2-6微克待轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒DNA(質(zhì)粒總體積不宜超過20微升)，加入到100微升氯化鈣溶液中，混勻。
d) 把DNA-氯化鈣溶液加入到100微升BBS溶液中，混勻，室溫孵育10-20分鐘。此時不會產(chǎn)生可見的沉淀。
e) 把DNA-氯化鈣-BBS混合物均勻滴加到整個6孔板內(nèi)。在含5%二氧化碳的37℃細胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
f) 根據(jù)實驗要求和磷酸鈣對于不同細胞的毒性不同，在4-16小時后輕輕晃動培養(yǎng)板數(shù)次以充分懸浮一些磷酸鈣沉淀，吸去
含磷酸鈣沉淀的培養(yǎng)液，加入2毫升新鮮的完全培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。
g) 通常在轉(zhuǎn)染約24小時后就可以檢測到轉(zhuǎn)染基因的表達。
2. 對于懸浮細胞：

a) 離心收集懸浮細胞，用PBS洗滌一次。
b) 按照上面的步驟c)和d)制備DNA-氯化鈣-BBS混合物。
c) 每106個細胞的沉淀，用100微升DNA-氯化鈣-BBS混合物重新懸浮，室溫放置20分鐘。
d) 在一個6孔板孔內(nèi)加入2毫升完全培養(yǎng)液，然后加入來自上一步的細胞-DNA-氯化鈣-BBS混合物，混勻。
e) 在含5%二氧化碳的37℃細胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
f) 根據(jù)實驗要求和磷酸鈣對于不同細胞的毒性不同，在4-16小時后離心收集細胞，用PBS洗一次，然后用2毫升完全培養(yǎng)液
重新懸浮細胞，繼續(xù)培養(yǎng)。
g) 通常在轉(zhuǎn)染約24小時后就可以檢測到轉(zhuǎn)染基因的表達。