產(chǎn)品簡介：

Ø 碧云天生產(chǎn)的細(xì)胞凋亡－DNA Ladder抽提試劑盒(Apoptosis, DNA Ladder Extraction Kit)，是針對細(xì)胞凋亡過程中產(chǎn)生的

核小體間的DNA鏈斷裂而設(shè)計(jì)的。可以非常有效地抽提最小片斷為180-200bp的DNA ladder，同時又可以抽提到50kb以上的基因
組DNA。
Ø DNA ladder也稱DNA fragmentation，是細(xì)胞凋亡的一個重要指標(biāo)。通常觀察到DNA ladder，就可以判定細(xì)胞發(fā)生了凋亡。
Ø 本試劑盒足夠抽提50個細(xì)胞或組織樣品。



包裝清單：

樣品裂解液 30毫升
蛋白酶K 130微升
10M 醋酸銨 6毫升
TE 6毫升
說明書 1份




保存條件：

-20℃保存，一年有效。



注意事項(xiàng)：

Ø 需自備Tris平衡苯酚、氯仿和無水乙醇。Tris平衡苯酚可以向碧云天訂購。


Ø 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說明：

1.
樣品收集


a) 對于組織樣品：
切下組織，并剪切成小塊，置液氮中凍結(jié)，研碎或搗碎。
b) 對于貼壁細(xì)胞：
胰酶消化后，PBS或生理鹽水洗一次，1000-2000g離心1-2分鐘，棄上清，收集細(xì)胞。
c) 對于懸浮細(xì)胞：
1000-2000g離心1-2分鐘，棄上清，收集細(xì)胞。
2. DNA ladder抽提

a) 樣品處理完畢后，每1毫升樣品裂解液中加入5微升蛋白酶K，混勻。
b) 對于上述處理好的樣品，每5毫克組織或者106個細(xì)胞中加入500微升添加了蛋白酶K的樣品裂解液，Vortex混勻，充分裂
解組織或細(xì)胞。
c) 50℃水浴消化過夜。

d) 加入500微升Tris平衡苯酚抽提樣品。
加入Tris平衡苯酚后可以Vortex，或劇烈顛倒或晃動10-30秒，以使酚相和水相充分相互作用。然后4℃，約12000g離心5
分鐘。
e) 吸出酚相及中間相(可以吸除少量靠近中間相的水相液體)，剩余的水相用等體積Tris平衡酚再抽提一次。
f) 吸出酚相及中間相 (可以吸除少量靠近中間相的水相液體)，剩余的水相用等體積氯仿再抽提一次。
g) 吸出約300微升上清液，加入60微升10M醋酸銨和600微升無水乙醇，顛倒數(shù)次混勻，此時可見DNA沉淀產(chǎn)生。-20℃凍存1

小時，以充分沉淀小片斷DNA。
h) 12,000g離心10分鐘，棄上清。加入70%乙醇洗滌DNA沉淀一次。
i) 盡量吸除殘余的乙醇，待看不到明顯的液體時，立即加入50-100微升TE溶解DNA。 注意：不可過分干燥基因組DNA沉

淀，否則會極難溶解。如果發(fā)現(xiàn)DNA沉淀難以溶解，可以在4℃用搖床緩慢搖動過夜，以溶解DNA沉淀。
j) 取部分抽提得到的基因組DNA，瓊脂糖凝膠電泳分析。如果細(xì)胞發(fā)生凋亡，就可以觀察到典型的DNA ladder。