北京伯奧克生物技術有限公司蛋白指紋圖譜SELDI實驗技術服務

一、簡介：
北京伯奧克生物技術有限公司擁有較為成熟的SELDI-TOF-MS技術，用于快速而有效地對蛋白樣品進行分離、處理、數據分析和鑒定；建立蛋白質組數據庫、發現疾病的相關蛋白和具有重要應用前景的生物標記分子、建立疾病的早期診斷和治療監測方法。中心擁有的大規模基因組學測序與研究平臺和生物信息學技術平臺是蛋白質組學研究的重要保證。我們依靠中心實驗室內所有的儀器，為廣大科研工作者提供先進的服務——蛋白質樣品SELDI-質譜-數據處理分析。

二、設備儀器：
Ciphergen® SELDI-TOF-MS (Surface Enhanced Laser Desorption Ionization, time-of fight mass spectrometry)表面加強激光解吸電離飛行時間質譜儀(蛋白質指紋圖譜儀)
ProteinChip SELDI系統用于從大量復雜生物學樣品中快速獲得蛋白質分子量圖譜，發現Biomarker。它使用表面增強的激光解吸離子（Surface Enhanced Laser Desorption/Ionization）技術來捕獲、檢測和測量復雜生物樣品中的肽段和蛋白質的分子量。
Bruker Daltonics  solarix® FTMS
solarix—— 新一代雜聯Qq-FTMS系統，體現了質譜能力與擴展性能核心技術提高的頂峰。這些技術提高包括：超高的靈敏度 、無可匹敵的質量準確度和寬譜分辨率 、寬范圍結構解析工具包括電子轉移解析(ETD) 、擴拓的質量范圍 、選擇性離子富集和強化的動態范圍 、針對應用的優化解決方案包。solarix 系列代表了最新的FTMS，是目前市場上最靈敏、最準確、最高分辨力和最寬動態范圍的儀器。 solarix 家族也擁有無與倫比的兼容性和超出其他所有儀器的客戶定制能力，可與ETD等多種配件結合使用。

三、測試范圍：
針對血清、血漿、體液、組織、真菌、細菌、細胞培養物以及植物等樣本的差異蛋白質組研究，以蛋白質芯片為載體，通過對目標疾病樣本組及對照組之間進行鑒定，以期找到能夠區分不同組別的差異峰，并通過對差異峰進行蛋白質鑒定，期望找到與目標疾病密切關聯的基因/蛋白

四、蛋白質芯片操作流程圖
SELDI蛋白質芯片的使用包括四個步驟：
步驟一：芯片類型的選擇
蛋白質芯片提供了多種色譜的功能，包括親水、疏水、陽離子交換、陰離子交換以及金屬親和表面等。此外，通過共價偶聯選定的蛋白質或者其他目標分子，可以對芯片表面實現預活化，從而設計出具有更高針對性、特異性的芯片。
步驟二：上樣
血清、細胞或者組織的裂解液、尿、腦脊液，或者其他蛋白質勻漿液等復雜的生物學樣品——包括那些含有高濃度鹽離子和去垢劑的樣品——都可以直接上樣于蛋白質芯片表面。樣品通過手工加樣或者自動上樣儀進行點樣。復雜蛋白質樣品中的一個特定亞群將通過簡單的化學作用或者蛋白質相互作用被芯片捕獲。
步驟三：未結合成分的洗脫
孵育后，未結合的蛋白和其他成分從芯片表面洗脫掉。只有那些特異性結合的蛋白質才保留下來用于進一步的分析。這種選擇性的洗脫進一步選取基于芯片特色的蛋白質集合。
步驟四：在SELDI蛋白質閱讀機上進行分析
在洗脫步驟之后，點加上含有能量吸收分子（EAM）的有機溶液。EAMs對樣品的離子化起關鍵作用。在蛋白質溶解到含有EAM的溶液之后，溶液揮發掉，在芯片表面形成蛋白質和EAMs的共結晶。
芯片在SELDI閱讀機上進行分析，后者是一種時間飛行質譜。芯片閱讀機內有一個氮源的激光器，導致離子化和解吸附過程的產生。激光能量誘導蛋白質離子化以及從晶體態到氣態的轉變。
一旦進入到氣態，帶電蛋白質分子在一個分離電壓作用下迅速地運動，或稱“飛行”。分離電壓對樣品中所有的分子具有相同的作用，使之表現出基于分子量差別的不同飛行時間。SELDI閱讀機記錄下這些飛行時間，換算成分子量。

五、送樣須知：
1、樣品來源：以血清為例，采集臨床病人及正常人血清，并做好臨床資料的收集。采樣數量每組30例以上（統計要求），一般情況下病人樣品與正常人樣本相等，也可以病人樣品略多于正常人。其他標本（如組織細胞裂解液）請自行蛋白濃度測定后送檢。
 2、寄送要求：蛋白質條帶和干粉冰袋包裝寄送，蛋白質溶液干冰或液氮包裝寄送，請告知運單號我們會安排專人接收。北京本地客戶可上門收樣。
注：樣本應避免各類污染和反復凍融。

六、檢測報告：
從收到樣品起5個工作日內可給出樣品的檢測報告，以電子郵件的形式發給您并附帶檢測結果分析。包括結果有：質譜圖原始數據、肽段分子量、數據庫檢索結果； 基于SPSS和BPS分析軟件對實驗得出的原始質譜數據進行分析，分析項目包括原始數據的分布情況分析、差異峰的篩選、聚類分析、主成分分析（PCA）、疾病預測模型的構建及差異峰所對應的蛋白的生物信息學鑒定六個項目，以充分挖掘原始數據中有價值的信息

七、實驗周期及收費標準：
 項目 單價 周期
1 SELDI蛋白質芯片表達譜 300元/例 5個工作日
2 Qq-FTMS蛋白鑒定 15000元/個 90個工作日
 
八、質量承諾：提供客觀的蛋白質質譜分析實驗結果，鑒定不成功不收取任何費用。實驗結束后所有實驗原始數據均由客戶帶回，所有相關知識產權歸客戶所有。 
 
九、成功案例
蛋白芯片技術篩選肝癌血清標志蛋白的初步研究 鄭燕華  李寧  張建中 《中華檢驗醫學雜志》 2005年06期
SELDI-TOF-MS在腫瘤性膽囊息肉樣病變診斷中的作用 作者:李永哲,胡朝軍,李寧, <<中華外科雜志>>2008年 第46卷 第7期
血清蛋白質指紋圖譜模型在腎癌診斷中的應用 鄧碧萍.李寧.王彭 [期刊論文] -中華泌尿外科雜志2006(8)
應用SELDI質譜技術篩選胰腺癌患者的血清標志蛋白A screening for specific biomarkers in serum of pancreatic cancer patients by SELDI technology 作者:胡朝軍,李寧,劉永鋒,《中國普通外科雜志》CHINESE JOURNAL OF GENERAL SURGERY 2008年 第03期
血液蛋白質組與質譜儀檢測流程標準化初探 劉建棟 李永哲 李寧 《基礎醫學與臨床》  ISTIC SCI PKU 2007 27(2)  R341 R446-33 
電離-飛行時間-質譜技術分析免疫大鼠血清和腦脊液的變化 李寧 李永哲 高揚《中國神經免疫學和神經病學雜志》2008年第1期
癌胚抗原陰性的結直腸癌檢測和結直腸癌預后相關生物標記 屠世良.酈衛星.李寧. 《基礎醫學與臨床》2007(08)
應用蛋白指紋圖譜技術篩選原發性膽汁性肝硬化患者血清特異性標志物  胡朝軍 李永哲  李寧 《世界華人消化雜志》2008年1月28日第16卷第3期
應用蛋白質組學技術對脂肪肝患者血清標志物的篩選  顏懷軍 陳兆軍 李寧 《世界華人消化雜志》 2008年12月8日;16(34): 3904-3909
蛋白芯片聯合SELDI-TOF-MS在卵巢癌診斷中的應用  顧蓓 李艷 李紅霞 《山東醫藥》 2009 49(18) 
痰瘀互結證冠心病模型的病理機制及方證相應基礎研究 李欣志 《中國中醫科學院》  CNKI:CDMD:1.2008.200957
Serum methylated proteins as a novel method to differentiate hepatocellular carcinoma from hepatitis B induced chronic liver disease.Licheng Dai, Shangxian Gao, Jiandong Liu, Chuanding Yu, Ning Li, Peng Wang, Chunhai Li, Proc Amer Assoc Cancer Res, Volume 47, 2006
Serum protein fingerprint of patients with pancreatic cancer by SELDI technology.Ning Ma, Chun-lin Ge , Feng-ming Luan, Dian-bo Yao ,Chao-jun Hu   Ning Li   and Yong-feng Liu  Chinese Journal of Cancer Research  Volume 20, Number 3 / 2008
Screening of serum biomarkers in hepatocellular carcinoma by SELDI technique:a preliminary study.ZHENG Yan-hua, ZOU De-wei, FENG Kai, CUI Yan, ZHANG Ming, LI Ning, XU Yang, ZHANG Jian-zhong, Chinese Journal of Laboratory Medicine;2005-06
Serum proteomic fingerprintings as a novel reference pattern to distinguish cancer from non-cancer in early stage and monitor cancer prognosis: A multi center three-year study in China. Shangxian Gao, Xiaohang Zhao, Ning Li and Zhenhua Yang ,Proc Amer Assoc Cancer Res, Volume 46, 2005
MALDI-TOF MS combined with magnetic beads for detecting serum protein biomarkers and establishment of boosting decision tree model for diagnosis of systemic lupus erythematosus Zhuochun Huang, Yunying Shi, Bei Cai, Lanlan Wang, Yongkang Wu, Binwu Ying, Ning Li , Chaojun Hu and Yongzhe Li Rheumatology 2009;48:626-631
Promising Diagnostic Biomarkers for Primary Biliary Cirrhosis Identified With Magnetic Beads and MALDI-TOF-MS YONG-ZHE LI, CHAO-JUN HU, XIAO-MEI LENG,GUAN-FEI ZHAO, NING LI,  THE ANATOMICAL RECORD 292:455-460(2009)
Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry Combined with Magnetic Beads for Detecting Serum Protien Biomarkers in Parkinson’s Disease Yao-Hua Li ,Jian Wang ,Xiao-Li Zheng, Yan-Li, Shun Yu ,Xin He,Piu Chan  European Neurology Eur Neurol 2011;65:105-111
Serum proteomic profiling analysis of chronic arsenic exposure by using SELDI-TOF-MS technology.Lijun Zhao,Yanhui Gao,Yanmei Yang,Yudan Wei,Yuanyuan Li,Hongqi Feng,Wei Wei,Yunpeng Ding,Dianjun Sun  Toxicology Letters 195 (2010) 155–160
Identification of serum biomarkers for lung cancer using magnetic bead-based SELDI-TOF-MS. Qi-bin SONG,Wei-guo HU,Peng WANG,Yi YAO Hua-zeng ZENG  Acta Pharmacologica Sinica 2011:1-6
Proteomic profiling in the sera of workers occupationally exposed to arsenic and lead: identification of potential biomarkers  Rihong Zhai, Suhua Su, Xin Lu, Ruiqing Liao, Xianmin Ge, Min He, Yuanjiao Huang, Sui Mai, Xi Lu & David Christiani,  BioMetals (2005) 18:603–613
Application of serum protein fingerprint in diagnosis of papillary thyroid carcinoma Jia-XiangWang, Jie-kai Yu, Li Wang, Qiu-Liang Liu, Jiao Zhang and Shu Zheng  Proteomics 2006, 6, 5344–5349
Diagnosis of gastric cancer using decision tree classification of mass spectral data  Yahui Su, Jing Shen, Honggang Qian, Huachong Ma, Cancer Sci | January 2007 | vol. 98 | no. 1 | 37–43
Prediction of chronic hepatitis B, liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma by SELDI-based serum decision tree classiWcation  Jiefeng Cui • Xiaonan Kang • Zhi Dai • Cheng Huang • Haijun Zhou • Kun Guo •Yan Li • Yu Zhang • Ruixia Sun • Jie Chen • Yang Li • Zhaoyou Tang •Toshimasa Uemura • Yinkun Liu  J Cancer Res Clin Oncol (2007) 133:825–834
Toward the Proteomic Identification of Biomarkers for the Prediction of HBV Related Hepatocellular Carcinoma Qing-Yu He, Rui Zhu, Ting Lei,,Mandy Y.M. Ng,John M. Luk, Pak Sham, George K.K. Lau,and Jen-Fu Chiu   Journal of Cellular Biochemistry 103:740–752 (2008)
An approach to the characterization of serum low-molecular weight proteins/peptides in liver injury using SELDI–TOF MS and factor analysis Xiaoli Liu a, Lanjuan Li a,Guoyi Zhang b, Guoping Sheng a, Wei Xu   Clinical Biochemistry 40 (2007) 1266–1271
Serum diagnosis of diffuse large B-cell lymphomas and further identification of response to therapy using SELDI-TOF-MS and tree analysis patterning Xing Zhang, Bo Wang, Xiao-shi Zhang Zhi-ming Li, Zhongzhen Guan and Wen-qi Jiang   BMC Cancer 2007, 7:235

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