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早期的shRNA載體多采用RNA聚合酶III型啟動子介導shRNA的表達，RNA聚合酶III型啟動子如鼠源的U6啟動子和人源的H1啟動子可以在哺乳動物細胞中表達小分子RNA。
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實驗原理
早期的shRNA載體多采用RNA聚合酶III型啟動子介導shRNA的表達，RNA聚合酶III型啟動子如鼠源的U6啟動子和人源的H1啟動子可以在哺乳動物細胞中表達小分子RNA。隨著miRNA干擾機制的深入研究，發展出第二代shRNA載體，即采用RNA聚合酶II型啟動子CMV表達含側翼序列的miRNA模擬物。該載體模擬miRNA的加工，表達出來的shRNA進入RISC沉默復合物的效率要比RNA聚合酶III型啟動子表達的shRNA高數十倍，抑制效率更好，且可以和EGFP協同表達，方便觀察轉染效率。
實驗流程
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