免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法,是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。免疫共沉淀具有經翻譯后修飾的,處于天然狀態的優點。
免疫共沉淀優點介紹
(1)相互作用的蛋白質都是經翻譯后修飾的,處于天然狀態;
(2)蛋白的相互作用是在自然狀態下進行的,可以避免人為的影響;
(3)可以分離得到天然狀態的相互作用蛋白復合物。
免疫共沉淀注意事項
(1) 確保共沉淀的蛋白是由所加入的抗體沉淀得到的,而并非外源非特異蛋白,單克隆抗體的使用有助于避免污染的發生;
(2) 要確保抗體的特異性,即在不表達抗原的細胞溶解物中添加抗體后不會引起共沉淀;
(3) 確定蛋白間的相互作用是發生在細胞中,而不是由于細胞的溶解才發生的,這需要進行蛋白質的定位來確定。
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