免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法,是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。免疫共沉淀具有經(jīng)翻譯后修飾的,處于天然狀態(tài)的優(yōu)點(diǎn)。
免疫共沉淀優(yōu)點(diǎn)介紹
。1)相互作用的蛋白質(zhì)都是經(jīng)翻譯后修飾的,處于天然狀態(tài);
(2)蛋白的相互作用是在自然狀態(tài)下進(jìn)行的,可以避免人為的影響;
。3)可以分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復(fù)合物。
免疫共沉淀注意事項(xiàng)
。1) 確保共沉淀的蛋白是由所加入的抗體沉淀得到的,而并非外源非特異蛋白,單克隆抗體的使用有助于避免污染的發(fā)生;
。2) 要確保抗體的特異性,即在不表達(dá)抗原的細(xì)胞溶解物中添加抗體后不會(huì)引起共沉淀;
(3) 確定蛋白間的相互作用是發(fā)生在細(xì)胞中,而不是由于細(xì)胞的溶解才發(fā)生的,這需要進(jìn)行蛋白質(zhì)的定位來確定。
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