BTP-N端測序可以解決的生物學問題

蛋白表達產物的驗證：重組蛋白插入位點和表達順序是否正確；蛋白品質量控制；

細胞株建立和發酵過程中蛋白產物的驗證：驗證細胞株建立和發酵過程中蛋白產物N端甲硫氨酸和信號肽是否正確處理；

蛋白降解/酶切分析：對降解/酶切形成的新蛋白片段N端進行分析，確定斷裂/酶切位點；

De-novo測序：對于蛋白數據庫中不存在的全新蛋白序列進行分析。

百泰派克公司也建立了以先進的LC-MS/MS技術進行N-端測序的平臺，可以測出封閉和修飾的蛋白質末端，與Edman降解法形成互補，保證N端測序服務的順利進行。

關于樣品

PVDF膜類樣品的準備過程

1.樣品電泳和電轉

對蛋白樣品進行1D或者2D跑膠

將蛋白膠上的樣品轉移至PVDF膜上；注意：千萬不要使用硝酸纖維素膜（Nitrocellulose membranes）

在此過程中請佩戴手套和頭套，避免自身角蛋白對測序結果的影響

2.PVDF膜的染色

染色過程中可以使用考馬斯亮藍或者立春紅對PVDF膜進行染色；注意：千萬不要使用銀染的方法進行染色

染色完成之后，可以使用雙蒸水對PVDF膜進行清洗

如果轉膜的緩沖液中含有甘氨酸，需要對PVDF膜進行多次沖洗，以避免甘氨酸對后續分析的影響

更詳細的樣品準備步驟與，見Edman測序樣品準備Protocol（下劃線部分加入超鏈接）

3.靶蛋白條帶獲取

PVDF膜染色后，靶條帶清晰可見，用潔凈的解剖刀將靶蛋白條帶切下

在蛋白量允許的情況下，可以準備2-3條靶條帶以增加靶蛋白的量

4.樣品運輸

密閉包裝后，冰袋運輸即可

溶液樣品的準備過程

1.蛋白的純度和用量

樣品純度要＞90%

Buffer中不要使用表面活性劑，并盡可能降低溶液的鹽濃度

Tris, glycine, guanidine, glycerol, sucrose, ethanolamine, SDS, Triton, X-100, Tween和其他的去垢劑, ammonium sulfate 和其他的銨鹽均會對后續的氨基酸鑒定產生影響，在樣品準備過程中要避免使用

樣品準備過程全程佩戴口罩和頭套，避免角蛋白的影響

樣品需要量在1-10ug

2.蛋白樣品的運輸

液體樣品推薦干冰運輸

液體樣品也可以在冷凍抽干或者真空抽干后，冰袋運輸

一站式服務

您只需下單-寄送樣品

百泰派克一站式服務完成：樣品處理-上機分析-數據分析-項目報告

表達純化后的蛋白產物，特別是蛋白品的分析過程中，需要對蛋白的末端進行驗證，以保證表達純化產物的N端和C端序列準確。Edman降解法是蛋白的N端序列分析中非常成熟的方法之一，得到廣泛應用。百泰派克公司采用島津公司最新推出的 edman測序系統，為官大科研工作者和科研客戶提供純化后蛋白產物、蛋白品、抗體以及蛋白疫苗的N端測序服務。采用我們的測序系統，可以測定N端30個氨基酸的序列信息。采用特定的蛋白上樣系統，我們最多可以測定N端的60-70個氨基酸。

如下圖所示，每一個Edman測序循環包括3步：第一步是在堿性條件下，PITC與蛋白N端的游離氨基結合；第二步是在酸性溶液中，N端殘基被切除；第三步是PITC結合的殘基轉化成為更為穩定的PTH殘基，經過在線的HPLC分析，根據洗脫時間最終確定氨基酸種類。

Edman測序反應過程

蛋白樣品首先進行SDS-PAGE的分離，保證樣品的純度滿足測序的要求；隨后將SDS-PAGE上的蛋白樣品轉移到PVDF膜上；經過染色確定把蛋白條帶并切出；Edman測序儀對得到的PVDF膜上的蛋白樣品進行分析。

Edman測序實驗流程圖

中/英文項目報告

在最終的技術報告中，百泰會為您提供詳細的中英文雙語版技術報告，報告包括：

1, 實驗步驟（中英文）

2, 相關的質譜參數（中英文）

3, 鑒定的氨基酸的詳細信息

4, 質譜圖片

5, 原始數據

研究案例

如下圖所示，通過Edman測序，可提供鑒定的氨基酸的詳細信息。