大家知道分光光度計的工作原理是1、物質(zhì)對光的選擇吸收，2、瑯伯-比爾定律。

我們這里討論瑯伯-比爾定律的限制性條件。其一：通過溶液的光必須是平行的；其二：通過溶液的光必須是單色光；其三：待測溶液必須是純凈的、均勻的且濃度不宜過高，這是瑯伯-比爾定律首要的三個前提條件。但是在實(shí)際的分光光度計的制造和使用過程中這三個條件是不可能達(dá)到的。其一：因為光是直線傳播的，在分光光度計制造過程中，燈源發(fā)出的光是發(fā)散的，經(jīng)過聚焦鏡進(jìn)行聚焦等直到經(jīng)過溶液的整體過程中，光是不可能平行的。其二：燈源發(fā)出的光是復(fù)合光，經(jīng)過狹縫，再經(jīng)過光柵分光等步驟，因為受到狹縫和光柵本身的限制，光柵分光不可能達(dá)到純單色光。還有光度計的整體設(shè)計問題，光度計不可能沒有其它的雜光存在。其三：用戶的溶液也不可能是純凈的，也會含有一些雜質(zhì)，這些對光度的吸收都會存在影響。除以上三個方面的影響外，在實(shí)際的光度計應(yīng)用過程中還會存在其他因素的影響，例如：1、經(jīng)過比色皿的光是否垂直；2、比色皿寬度是否為10mm的標(biāo)準(zhǔn)值；3、測試波長是否準(zhǔn)確；4、程序設(shè)計是否存在漏洞等等，都會直接影響到利用瑯伯-比爾定律計算出的結(jié)果。

所以在日常的測試過程中，得出的結(jié)果和瑯伯-比爾定律有些偏差是很正常的，只是我們關(guān)注偏差多少的問題。