技術原理：
KingFisher系列產品是適于分離DNA/RNA、蛋白和細胞的全自動提取純化系統，專為解決客戶現在和未來的所有純化問題而設計。創新的產品基于專利的KingFisher技術(專利號US 6447729, US 6448092)，通過特制的磁棒吸附、轉移和釋放磁珠，從而實現磁珠/樣品的轉移，避免了液體處理過程，提高了自動化程度。KingFisher技術的工作原理如下圖所示，樣品、溶液和磁珠置于微孔板或管中，磁棒表面套有專門的磁套用于保護磁棒避免與樣品/溶液/磁珠直接接觸。

kingfisher技術原理圖

磁珠的分類：
KingFisher技術所采用的磁珠粒徑在0.5-10μm之間，其內核是鐵氧體(Ferrite-based)，表面覆蓋高分子惰性材料，如苯乙烯、瓊脂糖等。與經典的層析介質相比，磁珠的粒徑比常規的介質粒徑(40μm)小，因而具有更大的比表面積，而某些具有超順磁性(Superparamagnetic)的磁珠具有更好的懸浮性能和分散性。

根據不同的表面處理與標記，可將磁珠分成各種不同的應用類型：

TiO2磷酸化多肽富集磁珠
磁珠表面覆蓋有一層TiO2材料，可以選擇性的與磷酸化的氨基酸殘基：絲氨酸(Ser)、酪氨酸(Tyr)、蘇氨酸(Thr)結合，而與酸性的氨基酸殘基的非特異性結合最小。與傳統的IMAC技術相比，其靈敏度提高了1000倍，富集后磷酸化蛋白的質譜檢出限達100 fmol。

谷胱甘肽(GSH)磁珠
該磁珠表面包被有瓊脂糖，并偶聯有谷胱甘肽，可以特異性的與谷胱甘肽-S-轉移酶(GST)結合，因而可用于純化帶有GST標簽的重組蛋白。TALON™磁珠。TALON磁珠的原理是基于采用Co離子的固定化金屬離子親和技術(IMAC)，可用于純化帶有組氨酸標簽(6xHis)的重組蛋白。

Protein A和Protein G磁珠
帶有Protein A或Protein G基團的磁珠，可廣泛應用于IgG的純化、免疫沉淀(IP)和免疫共沉淀(Co-IP)等。

硅質膜磁珠
這是一類最早出現的產品，廣泛應用于DNA、RNA的純化。其原理類似于使用硅質膜的離心柱，磁珠在高鹽條件下與核酸結合，而在低鹽環境下被洗脫，可用于全血、組織、細菌、病毒、植物等的核酸純化。

反相RPC磁珠
類似于反向層析的原理，可用于多肽的分離純化。Jimenez等使用KingFisher96和Dynabead® RPC 18磁珠僅需20min就可以平行處理96個樣品，用于與疾病相關的血清中肽段表達譜的研究。

ChargeSwitch®磁珠
ChargeSwitch磁珠的原理類似于離子交換技術，磁珠在pH < 6.5的緩沖液中帶正電，可與帶負電的核酸結合；在pH> 8.5的緩沖液中磁珠帶負電，使得之前吸附的核酸從磁珠上釋放。ChargeSwitch磁珠可在KingFisher平臺上完美使用。

技術應用：

基因組學
KingFisher磁珠提取純化平臺，非常適合于基因組學的研究。無論提取樣本的來源是微生物、動物、植物或是病毒，KingFisher都可以快速的純化出足夠數量的DNA或RNA。高質量的結果可以滿足下游應用(如熒光定量PCR)的需要。

畜牧獸醫、CDC的應用
使用專門的KingFisher試劑盒，可高效、高靈敏度地提取禽流感病毒(Avian influenza virus)、新城疫病毒(Newcastledisease virus)、牛病毒性腹瀉病毒(Bovine viral diarrheavirus)、立克次體(Coxiella burnetii)等。KingFisher結合Ambion的MagMAX-96 AI/ND病毒RNA提取試劑盒，應用于禽流感病毒的檢測，是獲得美國農業部(USDA)認可的高通量方法。提取得到的RNA可以通過ABI公司的Infleuenza A/H5 Kit檢測是否含有禽流感病毒，并進一步確認是否是備受關注的H5亞型。

食品安全領域的應用
經過特殊處理的Dynal免疫磁珠可以快速的從食品樣品、環境中富集致病菌，如沙門氏菌(Salmonella)、李斯特菌(Listeria)、軍團菌(Legionella)、大腸桿菌O157(E. coli O157)、賈地鞭毛蟲(Giardia cysts)和隱孢子蟲 (Cryptosporidium oocysts)等。采用磁珠純化技術可以有效的富集樣品中的微生物，減少背景干擾從而提高實驗的重復性和準確性，該方法已獲美國環保署(EPA)和美國官方分析化學師協會(AOAC)的認可。

食品中O157，沙門氏菌，單增李斯特菌免疫磁珠檢測流程（數據來源于上海浦東疾控）

臨床樣品的分子診斷
KingFisher可快速高通量的處理臨床樣品，提純的核酸可用于后續的分子診斷，如使用氟尿嘧啶(Fluorouracil, 5-FU)治療癌癥患者前需檢測人DPYP基因突變。KingFisher提供了一種高效、高靈敏度的從患者全血中純化核酸的方案，為DPYP基因的篩查設定了標準。KingFisher同樣適合于福爾馬林固定石蠟包埋(Formalin-Fixed and Parrffin-Embedded, FFPE)的組織樣品。

法醫學的應用
對于法醫工作而言，核酸提取的效率和穩定性都是十分重要的。KingFisher與專門的法醫樣品核酸提取磁珠試劑配合使用，可從不同來源的材料中純化高質量的DNA，包括干血、毛發、煙嘴等，最大處理量可達96個樣品/每次。

分離特定的細胞
通過標記特殊抗體的磁珠，KingFisher可以用于分離特定的細胞，如CD34、CD3、CD4等。



快速純化蛋白
即使是脆弱的蛋白復合體KingFisher可用于純化各種蛋白，從重組蛋白到治療用抗體，可以使用各種宿主細胞，如動物細胞、昆蟲細胞、酵母、細菌或轉基因動物/植物等，常規地純化抗體/抗原、藥物和疫苗。特別的，KingFisher技術是最溫和的純化方法，即使常規柱純化技術難以得到的復雜而精巧的蛋白復合體，也可以通過KingFisher磁珠提取分離技術完整的純化得到。

血清中肽段表達譜研究與生物標志物篩選
基于磁珠的色譜分離技術，可以讓你以一種簡單、有效和可重復的方式每天處理上百的樣品。采用基于疏水相互作用的反相RPC磁珠(Reverse Phase Chromatography)可以從血清樣品中結合多肽片段，經乙氰洗脫，即可獲得高質量的肽段表達譜。通過比較不同條件下肽段表達圖譜的差異，尋找潛在的可能血清生物標志物(Biomarker)。

加速噬菌體展示文庫的淘洗進程
與傳統基于固相微孔板的技術相比，KingFisher技術的優勢在于：提供了懸浮式的磁珠，巨大的比表面積可以進行更有效的淘洗(Panning)；轉移樣品而非液體的方法，使得清洗過程變得非常的簡單。全自動的方法易于提升通量，從而顯著提高噬菌體展示技術的效率。

更多信息請查詢賽默飛世爾官方網站： www.thermofisher.com
或中文網站：www.thermo.com.cn; www.fishersci.com.cn。

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