冷凍超薄切片原理和使用

瀏覽次數：5662　發布日期：2013-12-30　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

冷凍超薄切片技術是一種為了研究更接近于生物生活狀態結構和功能而發展起來的電鏡樣品制備技術。它是把樣品進行冷凍固定后，進行超薄切片，省去了經典超薄切片法的長時間的固定、脫水和也埋等處理。樣勵在切片前后，不經過強烈的化學處理，約胞結構能得到很好的保存；尤其是可溶性成分小會被抽提，使得電鏡圖像更接近于生物的生活狀態。可用于細胞免疫化學、可溶性成分自顯影、尤其在X射線微區成分分析等研究中。冷凍超薄切片機操作：在超薄切片機上加上高壓冷凍儀冷凍附件就可進行。冷凍超薄切片的制備程序可為兩類：

1.無溶液制備法：包括取材、快速冷蹤、冷凍替代、切片、干燥、染色或不染色、鏡檢等幾個步驟。主要用于可溶性物質的放射白顯影和X射線微區分析。

2.固定樣品制備法：包括取材、醛類闌定、樣品包埋或不包埋、冷凍保護處IR、快速冷凍切片、染包及鏡檢等步驟。適用于進行形態學、細胞化學和免疫細胞化學研究。

用戶經培訓后取得資格可自行使用超薄切片機，使用步驟如下：

1）開機

2）檢查是否處于切片模式，檢查頂光底光是否亮度正常；

3）將包埋塊放入適當夾頭并用六角扳手旋緊，以固定包埋塊；（然后將夾頭安裝在修快臺進行修快）；

4）將夾頭放入機械臂，并用手旋好螺絲上緊夾頭（不可用六角扳手）；

5）將玻璃刀/鉆石刀安裝在刀臺上，用手旋好螺絲以固定刀，并注意檢查刀臺是否固定于底座上；

6）檢查刀間隙角，調整刀臺角，選擇適當的夾頭角度等；

7）設定切片窗口（上下范圍）；

8）對刀；

9）選擇所用切片速度和厚度；