石蠟切片神經元高爾基法快速染色試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

石蠟切片神經元高爾基法快速染色試劑是一種旨在使用親銀還原技術，分析固定處理的石蠟包埋組織切片中神經元（neuron）、錐體細胞（pyramidal cell）、膠質細胞（glia cell）、少突觸膠質細胞（oligodendrocyte）和其它突起（process）尤其樹突（dendrites）形態學的權威而經典的技術方法。該技術經過精心改良Golgi-Cox方法、成功實驗證明的。主要適用于腦組織或外周神經組織石蠟切片的相關神經細胞檢測。廣泛用于動物腦神經病理生理解剖學的研究。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，顯色清晰。

技術背景

意大利科學家高爾基（Camillo Golgi）于1873年發明了神經細胞黑色反應的浸銀染色技術，從而開辟了神經系統形態結構、演變、單系發生、構建以及疾病等學科研究，并建立了神經學說。腦神經組織經固定，親銀染色后，呈現部分神經細胞完全染色，而其它神經細胞沒有任何著色的高度選擇性染色。

產品內容

固著液A（Reagent A）  毫升

固著液B（Reagent B）  毫升

脫蠟液（Reagent C）         毫升

補水液A（Reagent D）  毫升

補水液B（Reagent E）  毫升

補水液C（Reagent F）  毫升

清理液（Reagent G）  毫升

染色液（Reagent H）       毫升

顯色液Ａ（Reagent I）  毫升

顯色液B（Reagent J）  毫升

產品說明書  1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，避免光照；試劑具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證3月

用戶自備

30％蔗糖：用于樣品脫水處理

無離子水：用于工作液配制

1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器

無菌手術刀和鑷子：用于解剖動物腦組織

小型玻璃染色缸：用于組織或切片處理的容器

切片機：用于組織切片

明膠化載玻片和蓋玻片：用于切片后鋪片

中性樹脂：用于切片封片

光學顯微鏡：用于切片染色后觀察分析

實驗步驟

樣本固著處理

常規麻醉動物和手術（建議：使用生理鹽水由心臟處灌注三次，每次60毫升，去除血液直至澄清）即刻小心取出腦組織

用無菌手術刀將腦組織切成0.5厘米厚的組織塊

• 即刻用無菌鑷子夾起組織塊 
• 小心轉移到含有xx毫升固定液A（Reagent A）和xx毫升固定液B（Reagent B）的混合液里（20毫升/2塊組織塊）
• 室溫下浸泡孵育2周，避免光照
• 小心轉移到用戶自備的30％蔗糖溶液里
• 在4℃溫度下浸泡孵育48小時，避免光照（注意：不宜超過1周）
• 用綿紙吸干組織快
• 即刻進行常規石蠟處理后包埋
• 取出組織塊，進行緩慢石蠟切片，為20至100微米厚，并鋪片在明膠化載玻片上

脫蠟處理

• 取出10片待測的20至100微米厚的石蠟包埋的組織切片 
• 按下表依次放進小染色缸里孵育

• 小心移去切片上的清理液（Reagent G）

• 樣本染色處理

準備一個20毫升塑料瓶，加入10毫升用戶自備的無離子水，然后分別加入xx毫升顯色液A（Reagent I）和顯色液B（Reagent J），混勻，標記為顯色工作液（有效使用10天），避免光照。然后進行下列操作。

• 小心加上xx微升染色液（Reagent H），鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育30分鐘 
• 小心移去切片上的染色液（Reagent H）
• 室溫下，小心將切片置入xx毫升清理液（Reagent G）中孵育1分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent G）
• 小心加上xx微升顯色工作液，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育10至30分鐘，直至呈現黑色，即刻終止，避免光照（注意：期間可以在顯微鏡下觀察）
• 小心移去切片上的顯色工作液
• 室溫下，小心將切片置入xx毫升清理液（Reagent G）中孵育1分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent G）
• （選擇步驟）進行復染操作（建議使用甲苯酚紫（CRESYL VIOLET）復染試劑盒－YIJI80052）
• 透明處理
• 放上蓋玻片或封片（中性樹脂）
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：神經元、錐體細胞、膠質細胞、少突觸膠質細胞（橢圓形如同串珠）和其它突起，呈現黑色（如果復染――細胞核呈現藍色，胞漿尼氏（體）物質呈現粉紅至紫色）

注意事項

• 本產品為20次操作
• 操作時，須戴手套
• 試劑具有腐蝕性，注意操作安全，尤其使用染色液（Reagent H）
• 鋪片須使用明膠化載玻片，否則染色會掉片：第一用毛筆涂刷；第二保持濕潤3小時；第三用PARAFIN包裹后壓片
• 切片建議100至200微米，過厚和過薄不利于檢測神經細胞 
• 建議使用玻璃染色缸
• 每次更換試劑溶液時，保持切片面基本晾干
• 試劑溶液在切片表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿切片表面
• 整個操作，在避光狀態下進行
• 染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察 
• 樣品染色后保存，避免光照
• 本公司提供系列組織細胞神經系統成分染色試劑產品

質量標準

本產品經鑒定性能穩定

本產品經鑒定顯色清晰