細(xì)菌耐藥性檢測方法-中國微生物菌種查詢網(wǎng)
 1、細(xì)菌耐藥表型檢測：判斷細(xì)菌對(duì)抗菌藥物的耐藥性可根據(jù)NCCLS標(biāo)準(zhǔn)，通過測量紙片擴(kuò)散法、肉湯稀釋法和E試驗(yàn)的抑菌圈直徑、MIC值和IC值獲得。也可通過以下方法進(jìn)行檢測：
（1）耐藥篩選試驗(yàn)：以單一藥物的單一濃度檢測細(xì)菌的耐藥性被稱為耐藥篩選試驗(yàn)，臨床上常用于篩選耐甲氧西林葡萄球菌、萬古霉素中介的葡萄球菌、耐萬古霉素腸球菌及氨基糖苷類高水平耐藥的腸球菌等。
（2）折點(diǎn)敏感試驗(yàn)：僅用特定的抗菌藥物濃度（敏感、中介或耐藥折點(diǎn)MIC），而不使用測定MIC時(shí)所用的系列對(duì)倍稀釋抗生素濃度測試細(xì)菌對(duì)抗菌藥物的敏感性，稱為折點(diǎn)敏感試驗(yàn)。
（3）雙紙片協(xié)同試驗(yàn)：雙紙片協(xié)同試驗(yàn)是主要用于篩選產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）革蘭陰性桿菌的紙片瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)。若指示藥敏紙片在朝向阿莫西林/克拉維酸方向有抑菌圈擴(kuò)大現(xiàn)象（協(xié)同），說明測試菌產(chǎn)生超廣譜β-內(nèi)酰胺酶
（4）藥敏試驗(yàn)的儀器化和自動(dòng)化：全自動(dòng)細(xì)菌鑒定及藥敏分析儀如：Vitek-2、BD-Pheonix、Microscan等運(yùn)用折點(diǎn)敏感試驗(yàn)的原理可半定量測定抗菌藥物的MIC值。
 
2．β-內(nèi)酰胺酶檢測：主要有碘淀粉測定法（iodometric test）和頭孢硝噻吩紙片法（nitrocefin test）。臨床常用頭孢硝噻吩紙片法，β-內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)可快速檢測流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌、卡他莫拉菌和腸球菌對(duì)青霉素的耐藥性。如β-內(nèi)酰胺酶陽性，表示上述細(xì)菌對(duì)青霉素、氨芐西林、阿莫西林耐藥；表示葡萄球菌和腸球菌對(duì)青霉素（包括氨基、羧基和脲基青霉素）耐藥。

3．耐藥基因檢測：臨床可檢測的耐藥基因主要有：葡萄球菌與甲氧西林耐藥有關(guān)的MecA基因,大腸埃希菌與β-內(nèi)酰胺類耐藥有關(guān)的blaTEM、blaSHV、blaOXA基因，腸球菌與萬古霉素耐藥有關(guān)的vanA、vanB、vanC、vanD基因。檢測抗菌藥物耐藥基因的方法主要有：
PCR擴(kuò)增、PCR-RFLP分析、PCR-SSCP 分析、PCR-線性探針分析、生物芯片技術(shù) 、自動(dòng)DNA測序

 4．特殊耐藥菌檢測
（1）耐甲氧西林葡萄球菌檢測：對(duì) 1цg苯唑西林紙片的抑菌圈直徑≤10㎜，或其MIC≥4цg/ml的金黃色葡萄球菌和對(duì)1цg苯唑西林紙片的抑菌圈直徑≤17㎜，或MIC≥0.5цg/ml的凝固酶陰性葡萄球菌被稱為耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）。對(duì)MRS不論其體外藥敏試驗(yàn)結(jié)果，所有的β-內(nèi)酰胺類藥物和β-內(nèi)酰胺/β-內(nèi)酰胺酶抑制劑均顯示臨床無效；絕大多數(shù)的MRS常為多重耐藥，耐藥范圍包括氨基糖甙類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類等。
（2）耐青霉素肺炎鏈球菌檢測：當(dāng)對(duì)1цg苯唑西林紙片抑菌圈直徑〈20㎜或MIC〉0.06цg/ml均應(yīng)視為耐青霉素肺炎鏈球菌（PRSP）。臨床治療顯示 PRSP對(duì)氨卞西林、氨卞西林/舒巴坦、頭胞克肟、頭胞唑肟，臨床治療療效很差，但應(yīng)檢測對(duì)頭胞曲松、頭胞噻肟和美洛培南等的MIC以判斷是否對(duì)這些抗生素敏感。
（3）耐萬古霉素腸球菌檢測：腸球菌對(duì)30цg萬古霉素紙片抑菌圈直徑≤14㎜或MIC≥32цg/ml被稱為耐萬古霉素腸球菌（VRE）。針對(duì)多重萬古霉素藥物目前尚無有效治療方法，但對(duì)青霉素敏感的VRE可用青霉素和慶大霉素聯(lián)合治療，若對(duì)青霉素耐藥而不是高水平耐氨基糖甙類可用壁霉素+慶大霉素。
（4）產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的腸桿菌科細(xì)菌檢測： 超廣譜β-內(nèi)酰胺酶是一種能水解青霉素、廣譜頭孢菌素及單胺類的酶，主要由克雷伯菌、腸桿菌等細(xì)菌產(chǎn)生。當(dāng)通過篩選法時(shí)對(duì)頭孢泊肟、頭孢他啶（10цg/片）抑菌圈≤22㎜或氨曲南、頭孢噻肟（30цg/片）≤27㎜的菌株經(jīng)頭孢他啶（30цg/片）、頭孢他啶/克拉維酸（30/10цg）；頭孢噻肟（30цg/片）、頭孢噻肟/克拉維酸（30/10цg）兩組表型確證試驗(yàn)，其結(jié)果為兩組中任何一組藥物加克拉維酸與不加克拉維酸的抑菌圈相比，增大值≥5㎜時(shí)判斷為產(chǎn)ESBL菌株（圖7-13）。產(chǎn)ESBL克雷伯菌和大腸埃希菌不論其體外藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果如何，對(duì)青霉素、頭孢菌素和氨曲南治療無效。