Westernblot熒光印跡膜成像:干膜or濕膜 ?
干膜,還是濕膜成像:這是一個問題。
經過漫長的一天實驗做熒光蛋白印跡,首先成像,以便可以看到實驗成果。 這項工作流程沒有任何問題,但這可能無法生成最佳圖像。 如果您正在進行定性實驗或具有高豐度的蛋白,那么對膜進行成像是很好的。 然而,許多研究人員已經轉向熒光蛋白印跡法來定量分析低表達目的蛋白。
濕膜不適合成像,因為它們在成像過程中會慢慢變干,導致數據不一致。 由于濕膜的自發熒光與干膜不同,因此需要特別注意防止膜在成像過程中變干。 這意味著在成像過程添加緩沖液或將印跡膜放在塑料包裝中以防止干燥。 如果您曾經對濕的印跡進行成像,您就知道在長時間曝光期間防止膜干燥是一件麻煩事。 使用熒光印跡的一大優勢是隨時可進行成像。濕膜經歷長時間曝光時,看到高背景并不罕見。 高背景對靈敏度產生負面影響,使低豐度目標的檢測更具挑戰性。
濕膜成像顯然是不方便的,并且不太理想,但這并不意味著您需要等待數小時才能使膜干燥。 熒光蛋白印跡后快速干燥膜的方法是將其浸入甲醇中。 所需要的是PVDF膜在100%甲醇中快速浸泡15秒。 硝酸纖維素膜不耐化學品,因此使用20%甲醇代替。 酒精會從膜的孔隙中代出水分,加速干燥,讓您更快地對印跡進行成像。 這個快速提示將立即為您提供一個完美的印跡!