Western blot方法是生物實(shí)驗(yàn)室常用的蛋白檢測(cè)方法之一,自從1979提出至今已有數(shù)十年的歷史。常用的檢測(cè)方法有化學(xué)發(fā)光法和熒光方法。NIR近紅外熒光檢測(cè)方法,印跡膜自發(fā)熒光較低,信噪比高。NIR熒光檢測(cè)能獲得高信噪比和高質(zhì)量圖片主要依賴于激發(fā)強(qiáng)度大,精密的激光光源和專業(yè)的光學(xué)元件。我們Azure C500和600成像系統(tǒng)帶有雙激光光源,我們來看下激光光源能給我們帶來哪些好處。
1. 激光光源更容易達(dá)到染料的吸收峰
2.窄光譜激光減少光泄漏的產(chǎn)生
3.激光檢測(cè)在更短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)更高信噪比
4.激光檢測(cè)具有較低的背景
如果您有帶有激光激發(fā)的近紅外熒光成像系統(tǒng),那么您還可以進(jìn)行很多其他實(shí)驗(yàn)哦,如下但不限于:
◐ 雙色印跡膜成像:用于精準(zhǔn)定量,滿足期刊雜志需求
◐ in-cell western檢測(cè)實(shí)驗(yàn):傳統(tǒng)的western blot對(duì)于一些大分子量的蛋白檢測(cè)具有局限性,近紅外染料的問世,可以在細(xì)胞培養(yǎng)板上進(jìn)行in-cell western檢測(cè),省去了電泳,轉(zhuǎn)膜等等繁瑣的步驟,根據(jù)孵育二抗所發(fā)出熒光信號(hào)進(jìn)行檢測(cè);還可以用于藥物篩選,F(xiàn)DA已經(jīng)規(guī)定胰島素和一些抗腫瘤藥物的體外效價(jià)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)使用此方法
◐ EMSA(凝膠遷移或電泳遷移率檢測(cè))實(shí)驗(yàn):紅外熒光技術(shù)可以解決EMSA實(shí)驗(yàn)中探針示蹤問題,還可以進(jìn)行雙色標(biāo)記檢測(cè)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合;
◐ 活體成像:近紅外熒光染料具有良好的組織滲透性、無毒性和無放射性等特點(diǎn),可以真正無損傷的研究活體動(dòng)物體內(nèi)腫瘤的生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移,感染性疾病發(fā)生發(fā)展過程或者監(jiān)控活體生物體內(nèi)的細(xì)胞活動(dòng)和基因表達(dá),有效的研究觀測(cè)轉(zhuǎn)基因生理過程等。在這點(diǎn)上別拿我們家寶寶與輕(zhuan)奢(yong)品(jiqi)比,你懂的。
◐ 組織切片成像:使用IRDye®抗體或熒光探針,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)協(xié)議進(jìn)行標(biāo)記,可以在宏觀層面上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分析,組織切片紅外成像優(yōu)勢(shì)在于可以在使用顯微鏡之前宏觀快速瀏覽感興趣的部分;可進(jìn)行兩通道標(biāo)記,進(jìn)行多重標(biāo)記檢測(cè);可對(duì)染色部位進(jìn)行定量分析等。
◐ 微印跡分析(micro-western arrays):能夠?qū)estern blot的特異識(shí)別能力和DNA芯片檢測(cè)的高通量能力結(jié)合起來,幫助實(shí)驗(yàn)者一次實(shí)驗(yàn)可觀測(cè)到細(xì)胞中各種蛋白之間的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng),節(jié)省每次反復(fù)實(shí)驗(yàn)的人力和物力。這種方法是利用預(yù)制的micro-western膠(包含96個(gè)微膠)來預(yù)印細(xì)胞裂解物,進(jìn)行半干式轉(zhuǎn)印,將樣品轉(zhuǎn)移到NC膜上或PVDF膜上,進(jìn)行封閉,近紅外二抗孵育,使用近紅外成像系統(tǒng)進(jìn)行成像,這種新技術(shù),可用極少樣品和抗體分析大量數(shù)目不同蛋白的變化,極適合研究干細(xì)胞、癌細(xì)胞、組織發(fā)育等過程中的信號(hào)傳導(dǎo)路徑的變化。