徠卡101

組織脫水、透明、浸蠟、包埋

從患者到病理學家，準備樣本進行診斷需要細心、經驗以及合理的流程。

徠卡特地為大家整理了取材、組織脫水、透明、浸蠟、包埋以及染色等（常規、特殊、IHC以及FISH）101步操作流程，幫助大家更有效、更簡單地獲得實驗方案，避免錯誤的發生。

 

步驟六十四

了解染色

🙆 正確：了解你正在做的染色。

🙅 錯誤：只是“跟隨操作方法”，而不是真的知道染色結束需要觀察什么，可能會導致不夠好的染色結果。

A.PAs肝染色，正常情況下，脂褐素及糖原PA染色呈陽性，膽汁和含鐵血黃素PAS染色呈陰性（分別為黃色和棕色）。

B.銀 Gomer i染色方法染肺部真菌（曲霉屬）感染。大多數城市居民和吸煙者肺中的一個共同特征，即真菌的菌絲在非染色情況下都是黑色的。

 

步驟六十五

使用陽性對照

🙆 正確：總是使用陽性對照片可以清晰的知道，是否包含想要展示的結構/物質。

🙅 錯誤：如果我們在玻片中沒有看到想要顯示的結構或物質，我們認為它是不存在的。

使用Perl’s方法證明肝硬化含鐵血黃素（藍色）包含鐵。這是一個較好的鐵陽性對照染色。

 

步驟六十六

使用精確時間

🙆 正確：使用精確時間

🙅 錯誤：時間總是大概。不精確的時間產生不一致的結果。

這兩張皮膚玻片來自同一塊蠟塊，同樣使用PAS染色。A玻片酸處理（氧化步驟）為5分鐘，而B玻片只有30秒（錯誤）。結果B玻片基底膜染色效果很差。

 

步驟六十七

🙆正確：注意使用試劑的保質期。部分試劑或染料溶液會漸漸改變，另一些試劑和染料溶液不穩定，必須即配即用，還有的需要經過一段時間的氧化（成熟）才可以使用。

🙅 錯誤：我們假設所有的試劑都可用于不確定的周期。

Weigert’s 蘇木素由于過氧化呈現不干凈的染色效果，請注意膠原的棕色染色。

 

步驟六十八

正確儲存試劑

🙆 正確：正確儲存試劑。有些試劑需要冷藏，因為容易滋生真菌或霉菌。有的光敏感試劑，需要在黑暗中儲存。

🙅 錯誤：“我們所有的試劑都儲存在染色平臺上的架子上。有時我們能在玻片上看到散在的其他有機物。”

使用長了微生物的染色溶液（蘇木素）對玻片進行染色，可見大量外來微生物覆蓋在組織切片頂部。

 

步驟六十九

遵守染色方法

🙆 正確：認真完成程序的每一步。

🙅 錯誤：當使用相同的程序時，不同操作人員取得不同的染色結果。

福爾馬林固定的粘膜下層進行馬松三色染色( Masson trichrome)。在正確執行染色步驟時，包括第一步鉻酸染色（敏化或二媒染），A玻片呈現紅色的平滑肌。B玻片染色時,這一步被跳過，B玻片中可見肌肉缺乏差異性著色（小腸）。

 

步驟七十

記錄所有更改

🙆 正確：記錄所有實驗中偏離。

🙅 錯誤：染色結果不好，卻很難找尋原因，因為程序變化時沒做記錄。

浸銀染色網狀纖維有背景（沉淀），如果染色時沒有精確的執行染色步驟，則很難確定引起這樣問題的原因，( Gordon& Sweets染色法，腎臟）。

 

步驟七十一

🙆正確：注意洗滌步驟。盡可能規范操作，因為這經常引起結果的變化。

🙅 錯誤：實驗室工作人員使用不同的洗滌方法，有些人使用劇烈的攪拌，另一些則更為溫和。

使用相同的方法進行肝染色，唯一的區別是操作人員沖洗，洗滌步驟。網狀纖維均為黑色，但A比B呈現的更好( Gordon& Sweets法）。

 

步驟七十二

認真設置顯微鏡

🙆正確：在關鍵階段，如分化步驟使用顯微鏡在微觀下觀察控制。要注意在玻片濕潤未封片的情況下，顯微鏡的設置，可能呈現虛假的背景染色。

🙅 錯誤：對所有染色方法都只用裸眼觀察玻片。

A.濕組織(無蓋玻片)在顯微鏡下看關閉閉聚光器和光闌。注意假背景。

B.濕組織(無蓋玻片)在顯微鏡下看打開聚光器和光闌。注意清晰的背景。

 

接下來我們將會為大家帶來切片、優化脫蠟和試劑應用、考慮抗體交叉反應等操作流程小貼士，感興趣的話可以關注我們徠卡101系列，后續我們將會為您奉上更詳盡的內容。