細胞周期碘化丙啶紅色熒光流式細胞分析試劑盒產品說明書（中文版）
 
主要用途
 
細胞周期碘化丙啶（）紅色熒光流式細胞分析試劑是一種旨在通過細胞流式儀測定細胞中DNA結合碘化丙啶染料程度，來定量DNA含量，以進一步獲取細胞周期分布狀況的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細胞（動物、人體、植物、昆蟲等）的細胞周期分析。可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、細胞分裂、代謝等的研究。產品嚴格無菌，即到即用，分辨率高，操作簡捷，性能穩定。
 
技術背景細胞周期碘化丙啶紅色熒光流式細胞分析試劑盒產品說明書
 
細胞周期是評價細胞代謝、生理和病理狀況的重要指標。通過DNA結合染料，借助細胞流式儀，測定出DNA含量，根據DNA含量隨著細胞周期的不同而發生變化，來確定和區別細胞周期的不同階段。流式細胞術（FLOW CYTOMETRY）是七十年代發展起來的集計算機、激光、流體力學、細胞化學、細胞免疫學為一體的高科學技術。凋亡細胞是在正常G0/G1峰細胞群前出現亞二倍體峰（sub-G1）細胞群。
 
產品內容
 
清理液（Reagent A）     100毫升
固著液（Reagent B）     100毫升
緩沖液（Reagent C）      50毫升
染色液（Reagent D）    2毫升
產品說明書  1份
 
保存方法細胞周期碘化丙啶紅色熒光流式細胞分析試劑盒產品說明書
 
保存緩沖液（Reagent C）和染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent D）避免光照，有效保證6月
 
用戶自備
 
HANKS平衡鹽溶液（12022）或PBS緩沖溶液（12033）：用于清洗細胞
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（12024）：用于細胞脫離
完全細胞培養液（12052）：用于中和胰蛋白酶的處理
15毫升錐形離心管：用于細胞收集的操作
1.5毫升離心管：用于細胞染色的容器
（微型）臺式離心機：用于細胞收集的操作
細胞流式儀：用于細胞熒光分析
 
 細胞周期碘化丙啶紅色熒光流式細胞分析試劑盒產品說明書
 
實驗步驟
 
實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的試劑置入冰槽里融化。移出500微升緩沖液（Reagent C）到新的1.5毫升離心管，加入20微升染色液（Reagent D）混勻后標記為染色工作液，置于暗室里，避免光照。然后進行下列操作。
 

• 準備1瓶25cm²細胞培養瓶的待測細胞，鋪滿率達70％（約1百萬細胞數）
• 小心移出細胞培養液到15毫升錐形離心管（收集漂浮細胞）
• 加入2.5毫升用戶自備的HANKS平衡鹽溶液或PBS緩沖溶液到細胞培養瓶，覆蓋培養瓶表面
• 小心移出2.5毫升清洗液到上述15毫升錐形離心管
• 加入1毫升胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液到細胞培養瓶，鋪滿整個培養平面
• 置入37℃培養箱孵育1分種
• 振動培養瓶，使細胞脫落，然后加入5毫升用戶自備的完全細胞培養液
• 移入到上述15毫升錐形離心管（懸浮細胞從這一步驟開始）
• 放進臺式離心機離心5分鐘，速度為300g
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升預冷的清理液（Reagent A）到15毫升錐形離心管，混勻
• 移入到1.5毫升離心管
• 放進4℃微型臺式離心機離心5分鐘，速度為500g（或2000RPM，例如EPPENDORF 5415）
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升預冷的固著液（Reagent B），混勻
• 放進4℃冰箱里孵育16小時
• 放進4℃微型臺式離心機離心5分鐘，速度為500g（或2000RPM，例如EPPENDORF 5415）
• 小心抽去固著液
• 加入500微升染色工作液，用200微升槍頭上下輕柔抽吸，混勻細胞顆粒群
• 在暗室里37℃培養箱里孵育45分鐘
• 移入到細胞流式儀專用測試管（可放進4℃冰箱里待測）
• 即刻進行細胞流式儀分析：波長488nm氬離子激光出現紅色熒光（或488nm激發波長，610nm散發波長），觀察50000個細胞以上

 
注意事項
 

• 本產品為100次操作
• 確保實驗準確性，須收集所有懸浮和貼壁細胞
• 可用35mm培養皿或6孔培養板，細胞總量不得少于30萬
• 操作時，須戴手套
• 孵育時，必須避免光照
• 建議細胞染色完成后，即刻進行細胞流式儀分析。如果放進4℃冰箱里待測，不要超過1周
• 細胞流式儀分析前，須混勻內容物，避免細胞成團
• 細胞檢測量不得少于10000個
• 告知流式儀技術員有關細胞類型
• 本公司提供系列細胞周期分析試劑產品