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阻抗流式細胞儀的應用:區分存活和凋亡中國倉鼠卵巢(CHO)細胞

瀏覽次數:1000 發布日期:2023-10-17  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
測量生物細胞隨頻率變化的電阻抗,即電阻抗譜(EIS),在區分不同類型或不同狀態的細胞方面顯示出巨大的潛力。這種非標記和非侵入性技術可與微流控技術相結合,實現快速的單細胞分析。EIS結合微流控技術的應用實例包括分析白細胞亞群、區分病變紅細胞與健康紅細胞以及干細胞分化研究。本研究利用Ampha Z32 阻抗流式細胞儀(Amphasys,瑞士)在 0.3 至 30 MHz 頻率范圍內測量了中國倉鼠卵巢 CHO 細胞在營養缺乏條件下逐漸凋亡時阻抗振幅和相位的變化。然后采用了CHO 細胞雙殼模型和靈敏度分析,確定了最佳測量頻率和外部介質電導率,從而成功區分存活和凋亡的 CHO 細胞。
 
圖1B 阻抗流式細胞儀(Ampha Z32,Amphasys AG)信號的采集和轉導
A)細胞在不同頻率的交流電場中的檢測結果,低頻下反映細胞的體積特性,高頻下反映細胞膜的介電特性即細胞活性;B) 微流控芯片;C)流經交流電場的細胞的阻抗信號(藍色實部即電阻信號,綠色虛部即容性電抗信號),細胞膜完整性決定容性電抗的大小,故可通過虛部信號來區分活細胞和死細胞,最終以阻抗相位角-振幅散點圖反映出來

當單個細胞流經微流控芯片的兩組平行電極時,阻抗流式細胞儀將測量微流體通道中單細胞的多頻阻抗。電場中活細胞的等效電路由電阻(細胞質)和電容(細胞膜)組成,在笛卡爾坐標系中,阻抗Z(ω)可以描述為實部分Zr(ω)或電阻與虛部分Zi(ω)或容性電抗的矢量和。


相位角(θ)描述電阻和電抗之間的關系:
 

阻抗指數即振幅表示為:


在β-色散頻率區域,假設細胞體積與電極測量體積相比較小(體積分數較小),測量的差分阻抗(以一組電極為參考)與細胞的復介電常數圖片有關,如下所示:


:外部介質的復介電常數;ε :角頻率;φ:體積分數;KCM:克勞修斯-莫索提系數;K:電極常數;ε ̃_cell:單殼或雙殼模型介電常數(與細胞特性相關)。

本次研究在較高頻率下測得的阻抗顯示,在0時有一個存活細胞群,而在營養缺乏 48 小時后,存活細胞和凋亡細胞有兩個不同的細胞群。這一結果與介電泳測量技術的測量結果一致。而與介電泳相比,EIS 的優勢在于可同時進行多頻率測量,從而提供更廣泛的細胞生理狀態信息。該方法可廣泛用于生物制藥行業,對生物過程進行持續監測
 
— 原文閱讀 —
Salimi E, Bergin A, Thomson D, et al. Radio Frequency Electrical Impedance Spectroscopy of Chinese Hamster Ovary Cells[J].


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