線粒體功能破壞與神經退行性疾病有關。
如何在神經科學研究中使用微孔板讀板機來揭示線粒體功能障礙的影響。
神經退行性疾病的病因目前尚不完全清楚,大多數現有藥物只治療癥狀。進一步了解這些疾病的分子過程,特別是疾病的誘因和早期階段,對于確定潛在的新藥很重要。
眾所周知,線粒體功能的破壞與神經退行性疾病有關。例如除了ATP產生減少、ROS水平增加外,線粒體形態改變、密度降低和呼吸受損也出現于阿爾茨海默病(AD),而帕金森病(PD)中,線粒體功能障礙和疾病相關基因有非常緊密的聯系。
微孔板讀板機可以通過測量耗氧量來評估線粒體呼吸。一種常用的方法包括使用氧敏感熒光染料,用于確定代謝特征的呼吸速率,并以高通量形式評估線粒體功能障礙。
微孔板讀板機可以進行多種測定來評估代謝活性。例如Vybrant®MTT法CellTiter-Glo®和alamarBlueTM基于ATP水平或細胞活力的檢測提供代謝活性的測量(圖3)。
Fig. 3: Assay principles for Vybrant® MTT, alamarBlue™ and CellTiter-Glo®.
微孔板讀板機還可以進行線粒體的鈣保留能力(CRC)測定。線粒體通透性轉換孔與細胞死亡和線粒體損傷有關,而線粒體損傷又與神經退行性疾病有關。線粒體的鈣保留能力(CRC)用于篩選線粒體通透性轉換孔(MPTP)抑制劑的高通量測定。
Fig. 4: Principle of calcium retention assay. The membrane-impermeable Calcium Green reports on extra-mitochondrial Ca2+
盡管在理解線粒體功能障礙與神經退行性疾病之間的關系方面取得了進展,但藥物發現和開發中,能夠選擇性靶向線粒體并以可控方式遞送藥物仍然存在挑戰。早期發現和干預策略對成功至關重要。
在實踐中,可能有必要結合幾種不同的方法來恢復線粒體功能。多功能酶標儀為研究人員提供了一種靈活、強大的工具,可以使用新的和現有的分析方法來應對這些挑戰。
德國BMG LABTECH公司的多功能酶標儀VANTAstar®和CLARIOstar Plus都具有波長靈活性,適應任意檢測方法,并包含增強動態范圍技術,可在單次運行中獲得卓越性能。專利的線性可變濾光片濾光片光柵和濾光片選項具有極高的透光率和靈敏度。配置注射器可進行試劑添加并觀察藥物實時反應,而ACU大氣控制單元則能控制環境氣體濃度進行活細胞的長時程檢測。
總結
德國BMG LABTECH公司的多功能酶標儀結合了高性能、小型化分析、檢測時間短的優勢,為線粒體功能障礙分析提供了原料和其他資源可觀的節省。
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