CoIP、CHIP和RIP免疫沉淀技術的區別及具體應用流程

瀏覽次數：1620　發布日期：2024-1-23　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

免疫沉淀（Immunoprecipitation），又被稱為IP，是一種利用抗體與抗原之間的特異性結合，以及細菌蛋白質的“protein A/G”與抗體FC片段的結合特性開發出的技術。簡而言之，抗原與抗體之間的關系就像是一把鑰匙對應一把鎖，而“protein A/G”則像是一條鑰匙鏈，能夠幫助我們快速找到對應的鑰匙（抗體）。

CoIP、CHIP和RIP這些技術之間的差異主要在于與抗體結合的物質。

CoIP中的B代表蛋白質，CHIP中的B代表DNA，而RIP中的B則代表RNA。

1、CoIP技術

CoIP技術利用抗體的特異性反應來純化和富集目標蛋白質。

具體流程如下：先將抗體與細胞裂解液或表達上清中的相應蛋白結合，再與蛋白A/G偶聯的瓊脂糖或Sepharose珠子進行孵育。通過離心，我們可以得到一個包含珠子、蛋白A/G、抗體和目標蛋白的復合物（如果使用MagBeads，則可以通過磁力進行分離）。在高溫和還原劑的作用下，抗原與抗體分離，收集上清液，其中包含抗體、目標蛋白和一些雜蛋白。

2、CHIP技術

CHIP技術的原理則是利用抗原A與DNA B的結合，通過純化分析結合后的目的DNA片段，來獲取蛋白質與DNA相互作用的信息。

具體流程與CoIP類似：先將抗體與細胞裂解液或表達上清中的相應蛋白結合，再與蛋白A/G偶聯的瓊脂糖或Sepharose珠子進行孵育。通過離心，我們可以得到一個包含珠子、蛋白A/G、抗體和目標蛋白的復合物（如果使用MagBeads，則可以通過磁力進行分離）。在高溫和還原劑的作用下，抗原與抗體分離，收集上清液，其中包含抗體、目標蛋白和一些雜蛋白。

3、RIP技術

RIP技術的基本原理是利用抗原A與RNA B的結合，通過對目標RNA片段進行純化分析，來獲取RNA與蛋白質相互作用的詳細信息。

具體流程如下：首先，將抗體與細胞裂解液或表達上清液中的相應蛋白質結合。接著，將這一混合物與蛋白A/G偶聯的瓊脂糖或Sepharose珠子進行孵育。通過離心，我們可以獲得一個珠子-蛋白A/G-抗體-目標蛋白質的復合物（如果使用MagBeads，則可以通過磁力分離得到這一復合物）。在高溫和還原劑的作用下，抗原與抗體分離，收集上清液。上清液中包括抗體、目標蛋白質和少量其他蛋白質。