抗原抗體反應(yīng)原理、特點(diǎn)和影響因素介紹
抗原抗體的反應(yīng)原理：
Ag決定簇和Ab分子超變區(qū)分子間的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性；分子表面特異的可逆的弱結(jié)合力；親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體。
1、 親和力（affinity） 是抗體分子上一個(gè)抗原結(jié)合點(diǎn)與對(duì)應(yīng)抗原表位之間相互適應(yīng)而存在的引力。這是抗原與抗體之間固有的結(jié)合力。
2、親合力（avidity) 是指反應(yīng)系統(tǒng)中整個(gè)抗原分子與相應(yīng)抗體之間的結(jié)合能力。
親和力與親和性、抗體的結(jié)合價(jià)和抗原的抗原決定簇?cái)?shù)目相關(guān)。親和力越大，抗原抗體結(jié)合越牢固。
K=抗原抗體復(fù)合物濃度/（游離抗原濃度*游離抗體濃度）
K值大的抗體與抗原牢固結(jié)合，不易解離，說明該抗體有高親和力。
親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體：血清學(xué)反應(yīng)條件下，抗原抗體均帶負(fù)電荷，使極化的水分子在其周圍形成水化層，成為親水膠體。
當(dāng)抗原與抗體結(jié)合后，表面電荷減少，水化層變薄，失去親水性能，抗原抗體復(fù)合物成為疏水膠體。 電解質(zhì)作用下，中和膠體表面電荷，使疏水膠體靠攏，形成可見的抗原抗體復(fù)合物。
抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)：
1、特異性：抗原與抗體結(jié)合反應(yīng)的專一性。分子基礎(chǔ):抗原表位與抗體分子高變區(qū)之間空間構(gòu)型的互補(bǔ)性
2、交叉反應(yīng)：兩種不同的抗原分子具有部分相同或類似結(jié)構(gòu)的抗原表位，可與彼此相應(yīng)的抗血清發(fā)生反應(yīng)
3、可逆性： 解離后抗原抗體仍保持原有理化性質(zhì)和生物活性。
4、影響因素：抗體與抗原間的親合力，親合力越高，結(jié)合越牢固，越不易解離；環(huán)境因素－pH、離子強(qiáng)度
5、比例性：抗原與抗體發(fā)生可見反應(yīng)需遵循一定的量比關(guān)系。前帶(prezone)：抗體過量。后帶(postzone)：抗原過量。等價(jià)帶(equivalence zone)：抗原抗體比例合適
6、階段性：親水膠體轉(zhuǎn)疏水膠體的化學(xué)和物理變化過程：抗原抗體特異性結(jié)合（幾秒至幾分鐘，不出現(xiàn)可見反應(yīng)），非特異性促凝集（抗原-抗體復(fù)合物在適合溫度pH電解質(zhì)等環(huán)境因素影響下，進(jìn)一步交聯(lián)和聚集，出現(xiàn)肉眼可見沉淀、凝集、細(xì)胞溶解等反應(yīng)，數(shù)分鐘至數(shù)小時(shí)）
3、抗原抗體的反應(yīng)影響因素：
反應(yīng)物自身因素：
抗原：1.理化特性2.Ag決定簇?cái)?shù)量3.Ag決定簇種類
抗體：1.來源2.特異性與親和力3.濃度
環(huán)境條件：
電解質(zhì)：0.85%NaCl*使［ Ag-Ab ］表面的電勢(shì)下降，失去電荷，破壞水化層，形成凝集或沉淀。濃度過高出現(xiàn)鹽析。
酸堿度：pH6～9*酸凝集：當(dāng)pH為3左右時(shí)，接近細(xì)菌Ag的等電點(diǎn)，可出現(xiàn)非特異性凝集。
蛋白質(zhì)具有兩性電離性質(zhì)，每種都有固定的等電點(diǎn)。反應(yīng)液中pH過高或過低都可影響抗原或抗體的理化性質(zhì)。
溫度：15～40℃，冷凝集為4℃。在一定范圍內(nèi)，溫度增高，分子運(yùn)動(dòng)加快，反應(yīng)速度加快，但結(jié)合不牢固，易解離；溫度低，反應(yīng)速度慢，但結(jié)合牢固。
四、抗原抗體反應(yīng)的類型：
沉淀反應(yīng)；凝集反應(yīng)；補(bǔ)體參與的反應(yīng)；中和反應(yīng)；免疫標(biāo)記
免疫原和抗體的制備（免疫原和抗血清的制備；單克隆抗體與基因工程）
1、免疫原是誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗體并能與抗體發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)。半抗原是指僅有抗原性而無(wú)免疫原性的物質(zhì)，與載體結(jié)合后可具有免疫原性。
2、特異性IgG抗體的純化方法有鹽析法、凝膠過濾法、離子交換層析法、親和層析法等；制備單價(jià)特異性抗血清可采用親和層析法和吸附劑方法。
1）、可溶性免疫原制備：粗提——組織勻漿制備，細(xì)胞的破碎。
2）、可溶性免疫原提純：超速離心法，選擇性沉淀法，凝膠層析法，離子交換層析法，親和層析法，電泳法。
Ag決定簇和Ab分子超變區(qū)分子間的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性；分子表面特異的可逆的弱結(jié)合力；親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體。
1、 親和力（affinity） 是抗體分子上一個(gè)抗原結(jié)合點(diǎn)與對(duì)應(yīng)抗原表位之間相互適應(yīng)而存在的引力。這是抗原與抗體之間固有的結(jié)合力。
2、親合力（avidity) 是指反應(yīng)系統(tǒng)中整個(gè)抗原分子與相應(yīng)抗體之間的結(jié)合能力。
親和力與親和性、抗體的結(jié)合價(jià)和抗原的抗原決定簇?cái)?shù)目相關(guān)。親和力越大，抗原抗體結(jié)合越牢固。
K=抗原抗體復(fù)合物濃度/（游離抗原濃度*游離抗體濃度）
K值大的抗體與抗原牢固結(jié)合，不易解離，說明該抗體有高親和力。
親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體：血清學(xué)反應(yīng)條件下，抗原抗體均帶負(fù)電荷，使極化的水分子在其周圍形成水化層，成為親水膠體。
當(dāng)抗原與抗體結(jié)合后，表面電荷減少，水化層變薄，失去親水性能，抗原抗體復(fù)合物成為疏水膠體。 電解質(zhì)作用下，中和膠體表面電荷，使疏水膠體靠攏，形成可見的抗原抗體復(fù)合物。
抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)：
1、特異性：抗原與抗體結(jié)合反應(yīng)的專一性。分子基礎(chǔ):抗原表位與抗體分子高變區(qū)之間空間構(gòu)型的互補(bǔ)性
2、交叉反應(yīng)：兩種不同的抗原分子具有部分相同或類似結(jié)構(gòu)的抗原表位，可與彼此相應(yīng)的抗血清發(fā)生反應(yīng)
3、可逆性： 解離后抗原抗體仍保持原有理化性質(zhì)和生物活性。
4、影響因素：抗體與抗原間的親合力，親合力越高，結(jié)合越牢固，越不易解離；環(huán)境因素－pH、離子強(qiáng)度
5、比例性：抗原與抗體發(fā)生可見反應(yīng)需遵循一定的量比關(guān)系。前帶(prezone)：抗體過量。后帶(postzone)：抗原過量。等價(jià)帶(equivalence zone)：抗原抗體比例合適
6、階段性：親水膠體轉(zhuǎn)疏水膠體的化學(xué)和物理變化過程：抗原抗體特異性結(jié)合（幾秒至幾分鐘，不出現(xiàn)可見反應(yīng)），非特異性促凝集（抗原-抗體復(fù)合物在適合溫度pH電解質(zhì)等環(huán)境因素影響下，進(jìn)一步交聯(lián)和聚集，出現(xiàn)肉眼可見沉淀、凝集、細(xì)胞溶解等反應(yīng)，數(shù)分鐘至數(shù)小時(shí)）
3、抗原抗體的反應(yīng)影響因素：
反應(yīng)物自身因素：
抗原：1.理化特性2.Ag決定簇?cái)?shù)量3.Ag決定簇種類
抗體：1.來源2.特異性與親和力3.濃度
環(huán)境條件：
電解質(zhì)：0.85%NaCl*使［ Ag-Ab ］表面的電勢(shì)下降，失去電荷，破壞水化層，形成凝集或沉淀。濃度過高出現(xiàn)鹽析。
酸堿度：pH6～9*酸凝集：當(dāng)pH為3左右時(shí)，接近細(xì)菌Ag的等電點(diǎn)，可出現(xiàn)非特異性凝集。
蛋白質(zhì)具有兩性電離性質(zhì)，每種都有固定的等電點(diǎn)。反應(yīng)液中pH過高或過低都可影響抗原或抗體的理化性質(zhì)。
溫度：15～40℃，冷凝集為4℃。在一定范圍內(nèi)，溫度增高，分子運(yùn)動(dòng)加快，反應(yīng)速度加快，但結(jié)合不牢固，易解離；溫度低，反應(yīng)速度慢，但結(jié)合牢固。
四、抗原抗體反應(yīng)的類型：
沉淀反應(yīng)；凝集反應(yīng)；補(bǔ)體參與的反應(yīng)；中和反應(yīng)；免疫標(biāo)記
免疫原和抗體的制備（免疫原和抗血清的制備；單克隆抗體與基因工程）
1、免疫原是誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗體并能與抗體發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)。半抗原是指僅有抗原性而無(wú)免疫原性的物質(zhì)，與載體結(jié)合后可具有免疫原性。
2、特異性IgG抗體的純化方法有鹽析法、凝膠過濾法、離子交換層析法、親和層析法等；制備單價(jià)特異性抗血清可采用親和層析法和吸附劑方法。
1）、可溶性免疫原制備：粗提——組織勻漿制備，細(xì)胞的破碎。
2）、可溶性免疫原提純：超速離心法，選擇性沉淀法，凝膠層析法，離子交換層析法，親和層析法，電泳法。
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