宿主細胞蛋白（HCP）的法規要求對于確保生物制藥產品的質量和安全性至關重要。經測試，殘留的HCP可能引起不良反應，如免疫反應，也需要關注到的是殘留的HCP可能影響藥物的活性，導致藥物效果降低，影響治療效果。這些負面影響會直接導致藥物的安全性問題，甚至可能對患者的健康產生威脅。例如，某些研究表明，ECP（大腸桿菌多肽）的存在與抗ECP抗體和抗rhGH抗體的產生相關，可能導致免疫反應等。

HCP殘留含量也被認為是生物制品的關鍵質量屬性（CQA），是工藝穩健性監測的重要評價指標，也是產品的重要質控指標。對于HCP的法規要求是多層次、多方面的，旨在確保生物制藥產品的安全性、有效性和質量。許多國家和地區的藥品監管機構都要求生物藥物在上市前必須進行HCP殘留的檢測。這是為了確保藥物的安全性和有效性，滿足法規要求。制藥企業應嚴格遵守相關法規要求，采用合適的檢測方法和控制策略，確保HCP殘留量在可接受范圍內。



1.國際法規要求：

ICH Q6B指南：國際人用藥品注冊技術協調會（ICH）的Q6B指南指出，需要根據ICH準則采用敏感且經過驗證的有效方法來監控殘留的HCP，其殘留量通常要求小于100ppm。

美國藥典（USP）：USP<1132>章節規定，用一種靈敏度較高的方法檢測藥品中的HCP，其含量應該低于檢測限（通常小于100ppm，即1mg總蛋白中HCP含量應小于100ng，也即<0.01%）。

歐洲藥典（EP）：EP 2.6.34中規定，在生物制品中，HCP的含量應當小于0.1%。

2.國家/地區藥典要求：

中國藥典（2020版）：

針對CHO細胞，HCP殘留需要<0.05%（相當于小于500ppm）。

針對E.coli，HCP殘留需要<0.01%。

其他國家：不同國家和地區的藥典可能有各自的HCP殘留標準，但都旨在確保生物制藥產品的安全性和質量。


而在實驗室中常規的宿主細胞蛋白殘留檢測方法如下：

1、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）

原理：利用特異性抗體與宿主蛋白結合，通過測定抗原-抗體反應來定量宿主蛋白的殘留水平。

優點：靈敏度高，可用于定量檢測。

缺點：需要有針對特定HCPs的抗體，可能產生假陽性或假陰性的結果。

自動化：可以使用自動化工作站，如Biomek i7，來提高準確性和檢測通量。


2、二維電泳-質譜聯用法（2D-PAGE-MS）

原理：基于蛋白質分子量和等電點差異進行分離，通過質譜分析進行蛋白質鑒定。

優點：可檢測更廣泛的HCPs，提供全面的蛋白質譜。

缺點：操作復雜，需要較高的技術水平。


3、多肽映射法

原理：通過蛋白質酶切、高效液相色譜、質譜等步驟，獲得蛋白質的多肽圖譜，進行結構鑒定和定量分析。

優點：準確性高，適用于復雜樣品的分析。

缺點：操作步驟復雜，需要較高的技術水平和專業設備。


4、電泳法

包括CIE（毛細管電泳）、SDS-PAGE（十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳）等。

優點：反應時間短、靈敏性高（如CIE）。SDS-PAGE簡便、快速、重復性好。

缺點：分辨率低（如CIE、SDS-PAGE）、不能精確定量（如SDS-PAGE）。


5、質譜法

原理：直接檢測蛋白質的質量和結構，通過比對目標蛋白和宿主蛋白的質譜圖譜進行定量分析。

優點：高靈敏度、高分辨率，可同時檢測多個宿主蛋白。

缺點：需要復雜的樣品準備和數據分析過程。


6、生物活性測定法

原理：通過測定宿主蛋白對生物活性的影響來驗證殘留。

優點：提供宿主蛋白殘留對藥物活性的直接影響信息。

缺點：可能在特定情況下不夠敏感或特異性。


在選擇宿主細胞蛋白殘留檢測方法時，需要考慮多個因素，包括所需的靈敏度和準確性、樣品的復雜性、以及可用的設備和技術水平。通常，結合多種方法可以確保最終藥物產品的質量和安全性。


今天小貝帶來了

基于ELISA的自動化檢測宿主細胞蛋白殘留標準化流程——標準化無人值守


更高線性的標曲——高精度移液體現
  圖2. 使用CygnusTM CHO HCP ELISA 試劑盒對于自動化再現性的驗證。手工和自動化的標曲比較結果如圖二A和B所示，對比R2的數值自動化動化結果更好。

穩定的結果保證——高重現性
 
使用Biomek i7自動化工作站完成對不同時間宿主細胞培養基和細胞裂解液的蛋白定量檢測。


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