方案摘要：根據(jù)國家標準，生活飲用水中不應含有病原微生物，其中菌落總數(shù)不能超過100個CFU／ML），耐熱大腸菌群限值為不應檢出。本方案利用培養(yǎng)基自動制備分裝儀（一種集培養(yǎng)基制備、滅菌、分裝于一體的自動化設備），可精準控制培養(yǎng)基的配方比例、滅菌條件（如溫度、壓力、時間）和分裝體積，減少人工操作誤差，在大批量檢測中，可有效提升檢測效率。
 
方案詳情：
一、實驗原理
耐熱大腸菌（又稱糞大腸菌群）是一類能在44.5℃培養(yǎng)條件下生長繁殖的腸桿菌科細菌，主要來源于人和動物糞便，是飲用水受糞便污染的重要指示菌。檢測方法通常采用多管發(fā)酵法或濾膜法，需使用特定培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，通過觀察產(chǎn)氣現(xiàn)象或菌落特征判斷是否存在目標菌。RAYPA培養(yǎng)基自動制備分裝儀可精準控制培養(yǎng)基的制備流程，確保檢測過程中培養(yǎng)基的成分、滅菌條件和分裝精度符合微生物培養(yǎng)要求，從而實現(xiàn)對耐熱大腸菌的高效分離、培養(yǎng)和計數(shù)。
 
二、實驗準備
1、培養(yǎng)基和試劑
① EC培養(yǎng)基
② 伊紅美藍培養(yǎng)基
 
2、儀器與設備
①  恒溫水浴箱或培養(yǎng)箱：44.5℃±0.5℃。
②  RAYPA培養(yǎng)基自動制備分裝儀。
 
三、實驗步驟
1、使用RAYPA培養(yǎng)基自動制備分裝儀，自動制備和分裝實驗所需培養(yǎng)基。
 
2、自總大腸菌群乳糖發(fā)酵試驗中的陽性管(產(chǎn)酸產(chǎn)氣)中取1滴轉(zhuǎn)種于EC培養(yǎng)基中，置44.5℃±0.5℃水浴箱或隔水式恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)(水浴箱的水面應高于試管中培養(yǎng)基液面)，培養(yǎng)24h±2h，如所有管均不產(chǎn)氣，則可報告為未檢出，如有產(chǎn)氣者，則轉(zhuǎn)種于伊紅美藍瓊脂平板上，置44.5℃±0.5℃培養(yǎng)18 h~24 h，凡平板上有典型菌落者，則證實為耐熱大腸菌群陽性。
3、如檢測未經(jīng)含氯消毒劑消毒的水，且只想檢測耐熱大腸菌群時，或調(diào)査水源水的耐熱大腸菌群污染時，可直接用多管發(fā)酵法，將接種乳糖蛋白陳培養(yǎng)液后直接在44.5℃±0.5 ℃培養(yǎng)18h~24 h，凡平板上有典型菌落者，則證實為耐熱大腸菌群陽性。
 
四、實驗數(shù)據(jù)處理
根據(jù)證實為耐熱大腸菌群陽性的管數(shù)，對照MPN表，報告每100mL水樣中耐熱大腸菌群的MPN值。