Goldview I核酸染料——EB替代品的原理及使用方法

瀏覽次數：8530　發布日期：2012-1-6　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

GoldView(GV)是一種可代替溴化乙錠（EB）的新型核酸染料，其靈敏度與EB相當，使用方法與之完全相同，在100ml瓊脂糖膠溶液中加入5μl GoldView即可。在紫外透射光下雙鏈DNA呈現綠色熒光，也可用于染RNA。由于未發現GoldView有致癌作用，且靈敏度與EB相當，將有可能逐漸取代EB而得以廣泛應用。

　　概述

　　GoldView是一種可代替溴化乙錠（EB）的新型核酸染料，采用瓊脂糖電泳檢測DNA時，GoldView與核酸結合后能產生很強的熒光信號，其靈敏度與EB相當，使用方法與之完全相同。在紫外透射光下雙鏈DNA呈現綠色熒光，而且也可用于染RNA。

　　通過Ames試驗、小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗、小鼠睪丸精母細胞染色體畸變試驗，致突變性結果均為陰性；而溴化乙錠（EB）是一種強致癌劑。因此用Goldview代替EB不失為一種明智的選擇。

　　使用方法

　　1. 將100ml瓊脂糖凝膠溶液（濃度一般為0.8%~2%）在微波爐中融化。

　　2. 加入5μl GoldView，輕輕搖勻，避免產生氣泡。

　　3. 冷卻至不燙手時倒膠，待瓊脂糖凝膠完全凝固后上樣電泳。

　　4. 電泳完畢在紫外燈下觀察。若使用數碼相機照相記錄，則關閉相機的閃光燈，放在自動檔即可；若使用凝膠成像系統照相，通過調節光圈、曝光時間，選擇合適的濾光片，可得到成像清晰、背景較低的照片。

　　注意事項

　　1. 膠厚度不宜超過0.5cm，膠太厚會影響檢測的靈敏度。

　　2. 加入GoldView的瓊脂糖凝膠反復融化可能會對核酸檢測的靈敏度產生一定影響，但不明顯。

　　3. 通過凝膠電泳回收DNA片段時，建議使用GoldView染色，在自然光下切割DNA條帶，避免紫外線與EB對目的DNA產生的損傷，可明顯提高克隆、轉化、轉錄等分子生物學下游操作的效率。