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定量分析ChIP-qPCR數(shù)據(jù)的方法:Percent Input法和富集倍數(shù)法步驟介紹

瀏覽次數(shù):4166 發(fā)布日期:2023-2-22  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
ChIP-qPCR 數(shù)據(jù)需要針對可變性來源進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化,包括染色質(zhì)數(shù)量、免疫沉淀的效率(富集效率)和 DNA 回收率。
 
兩種常用的標(biāo)準(zhǔn)化 ChIP-qPCR 數(shù)據(jù)方法——Percent Input法和富集倍數(shù)法(Fold Enrichmen)。與input相關(guān)的ChIP-qPCR數(shù)據(jù)包括ChIP的背景水平和input染色質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)化。建議ChIP 實(shí)驗(yàn)重復(fù),盡可能將結(jié)果與背景信號和標(biāo)準(zhǔn)誤差一起顯示。
 
Percent Input
使用這種方法,從ChIP獲得的信號除以從input樣本中獲得的信號。input樣本代表ChIP中使用的染色質(zhì)數(shù)量。通常1%的起始染色質(zhì)用作input。

 

示例:計(jì)算input百分比

注意:如果起始input為1%,則從稀釋input的Ct值中減去100或6.644 cycles(100的log2)的稀釋因子(DF)。
 
 

富集倍數(shù)法
這種標(biāo)準(zhǔn)化方法也稱為“背景信號”或“相對無抗體對照”。該方法將ChIP 信號除以無抗體信號,將ChIP信號表示為信號相對于背景信號的倍數(shù)增加。該方法建立在背景信號的水平在不同的引物組、樣品和重復(fù)實(shí)驗(yàn)間可重復(fù)的假設(shè)上。背景信號水平在引物組、樣品和實(shí)驗(yàn)之間有所不同。
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