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LTXFECT線性PEI 40000高效低毒科研轉(zhuǎn)染試劑說明書

瀏覽次數(shù):73 發(fā)布日期:2025-5-12  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
在基因功能研究、重組蛋白生產(chǎn)和細(xì)胞治療領(lǐng)域,轉(zhuǎn)染效率與細(xì)胞活性始終是科研人員面臨的"雙刃劍"難題。中喬新舟自主研發(fā)的LTXFECT線性 PEI 40000,憑借其創(chuàng)新的分子設(shè)計與卓越性能,正為全球生命科學(xué)研究提供更優(yōu)解決方案。
 
如下是線性PEI 40000化學(xué)結(jié)構(gòu)式:

 
核心優(yōu)勢
 

√ 超80%平均轉(zhuǎn)染效率(HEK293/CHO等常見細(xì)胞系驗證)
√ 低細(xì)胞毒性保障實驗穩(wěn)定性
√ 任選包裝形式:粉末速溶配方-即配即用和即用型液體包裝
√ 兼容多種細(xì)胞系(含HEK293T/Sf9/HepG2等)
√ 無丙酰基殘留干擾

為何選擇中喬新舟LTXFECT線性PEI 40000?
 

相較于傳統(tǒng)分枝化結(jié)構(gòu),LTXFECT線性PEI 40000采用獨特線性聚合技術(shù):
• 高密度陽離子:通過精準(zhǔn)控制40000分子量,形成強效核酸結(jié)合位點
• 智能復(fù)合物:帶負(fù)電核酸與陽離子聚合物自組裝,穿透效率提升30%
• 生物相容性優(yōu)化:線性結(jié)構(gòu)減少細(xì)胞膜損傷,存活率提升至95%+
 
【突破性技術(shù)對比】
 

與常規(guī)PEI相比,LTXFECT線性PEI 40000實現(xiàn)三大革新:
1.溶解革新:直接水溶 vs 弱酸預(yù)處理+pH回調(diào)(節(jié)省15分鐘操作時間)
2.純度升級:完全脫落結(jié)構(gòu) vs 4-11%丙酰基殘留(避免DNA結(jié)合位點屏蔽)
3.效能飛躍:轉(zhuǎn)染效率提升20%+(經(jīng)CHO-K1細(xì)胞系等平行實驗驗證)
 
多場景應(yīng)用驗證
 

• 懸浮/貼壁細(xì)胞通用:HEK293系列穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建周期縮短至72小時
• 難轉(zhuǎn)染細(xì)胞突破:Hela細(xì)胞轉(zhuǎn)染成功率突破85%臨界值
• 昆蟲細(xì)胞適配:Sf9細(xì)胞蛋白表達量提升2.1倍(對比脂質(zhì)體法)
 
【專家級操作指南】
 

三步完成轉(zhuǎn)染:
1.配制:1mg/ml水溶液,渦旋10秒即完全溶解
2.復(fù)合:DNA: LTXFECT線性 PEI 40000=1:3(推薦初始比例)
3.轉(zhuǎn)染:6孔板體系僅需5分鐘孵育時間
 
【操作步驟】
 

試劑準(zhǔn)備:

1g粉劑定容在1L純水中,需用NaOH/HCL調(diào)節(jié)PH到6.90-7.10,一次性無菌濾器過濾,4℃?zhèn)溆谩?br />
瞬時轉(zhuǎn)染方法:

一. 接種細(xì)胞, 轉(zhuǎn)染前一天,用膠原酶消化細(xì)胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細(xì)胞濃度,將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細(xì)胞匯合度達到 70~80%。 

二. 準(zhǔn)備DNA-PEI 40000復(fù)合物,DNA、PEI 40000試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。用中喬新舟轉(zhuǎn)染專用減血清培養(yǎng)基(貨號:ZQ-300-ST)稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI 40000試劑。每1μg DNA 需用2-5μL線性PEI 40000轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI 40000轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25 min以形成DNA-PEI 40000復(fù)合物。 

三. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞,直接向每個孔中加入DNA-PEI 40000復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI 40000復(fù)合物。轉(zhuǎn)染3 h后,添加1/2體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。 

四.孵育細(xì)胞和分析結(jié)果,在CO2培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后最快7 h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達。請自行確定最適合檢測時間。
 
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法:

一.接種細(xì)胞,轉(zhuǎn)染前一天,用胰酶消化細(xì)胞并計數(shù)。調(diào)整細(xì)胞濃度,將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細(xì)胞匯合度達到70~80%。 

二.準(zhǔn)備DNA-PEI 40000復(fù)合物:DNA、PEI 40000試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。用中喬新舟轉(zhuǎn)染專用減血清培養(yǎng)基(貨號:ZQ-300-ST)稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μg DNA 需用2-5μL線性PEI 40000轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI 40000轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25 min以形成DNA-PEI 40000復(fù)合物。

三.轉(zhuǎn)染細(xì)胞,直接向每個孔中加入DNA-PEI 40000復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI 40000復(fù)合物。轉(zhuǎn)染3 h后,添加1/2體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。 

四.孵育細(xì)胞和分析結(jié)果:在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后最快7h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達。

五.轉(zhuǎn)染24 h后,將細(xì)胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中(將細(xì)胞稀釋10倍以上),在CO2培養(yǎng)箱中37℃孵育過夜。第二天加入與轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的篩選藥物。約1~2周可篩選到耐藥性克隆,在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。

以下是293T細(xì)胞轉(zhuǎn)染前后的細(xì)胞對比圖:

 
產(chǎn)品列表:

 


中喬新舟為每批次PEI 40000提供:
ISO9001質(zhì)量認(rèn)證
細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率驗證報告
專屬技術(shù)顧問支持
讓LTXFECT線性 PEI 40000成為您實驗室的"轉(zhuǎn)染加速器"!
發(fā)布者:上海中喬新舟生物科技有限公司
聯(lián)系電話:021-56760351
E-mail:hufangqiong@zqxzbio.com

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