間充質干細胞是一種具有自我復制能力和多向分化潛能的成體干細胞，廣泛存在于全身多種組織中，可在體外培養擴增，在特定條件下可分化為包括脂肪細胞、骨細胞、軟骨細胞等的細胞。
臍帶間充質干細胞提來源于健康足月分娩的新生兒臍帶，通過組織爬塊或酶消化法獲得，擁有強大的增殖及多向分化的能力。
本產品僅供科研使用，不可應用于臨床治療等其他方面。
處理原則
重要提示：為保證細胞質量，請解凍后（洗滌前）立即進行細胞計數。解凍后的細胞，在無菌條件下，立即置于預熱的細胞培養液中，按操作說明處理細胞。
臍帶間充質干細胞提來源于健康足月分娩的新生兒臍帶，通過組織爬塊或酶消化法獲得，擁有強大的增殖及多向分化的能力。
| 來源 | 健康產婦/新生兒臍帶 |
| 細胞類型 | 貼壁、呈梭形 |
| 培養液 | α-MEM，10% FBS，2mM L-glutamine, 1% 雙抗 |
| 生長條件 | 5% CO2，37℃ |
| 凍存液 | 70% α-MEM，20% FBS，10% DMSO |
| 質量控制 | 細菌、真菌、內毒素、支原體陰性； CD73,CD105,CD90表達陽性；CD14,CD19,CD34,CD45,HLA-DR表達陰性； 具備分化成脂肪、成骨、成軟骨等細胞的能力。 |
處理原則
- 產品自收到之日起在-135℃或更低溫度下可至少保存12個月；在-80℃可短期存儲4周。為保證產品質量，我們不建議客戶將細胞產品存儲于-80℃。
- 產品自收到后，請在無菌條件下并參照“復蘇和培養”操作說明，進行細胞的處理
- 我們建議客戶根據實際情況，存儲一部分細胞作為備份。
- 我們建議細胞的接種密度為2-5×10^4/cm2，細胞至少可傳12代。
- 由于各實驗室培養體系或操作方法的不同，我們不能保證細胞在客戶實驗室的所有生物學功能。
重要提示：為保證細胞質量，請解凍后（洗滌前）立即進行細胞計數。解凍后的細胞，在無菌條件下，立即置于預熱的細胞培養液中，按操作說明處理細胞。
- 水浴鍋升溫至37℃。
- 準備好9mL細胞培養液于15mL無菌離心管中，置于37℃水浴鍋預熱。
- 將凍存管從液氮中取出，置于轉移容器中。
- 凍存管在37℃水浴鍋內不斷搖動，至內容物融化。請仔細觀察，待凍存管內容物呈半融狀態，即刻從水浴鍋內取出凍存管。
- 用75%酒精消毒凍存管口及外壁，擦拭干凈。
- 在無菌工作臺內打開凍存管，用1mL移液器輕輕吹勻融化的細胞懸液，取20μL細胞懸液用于計數。
- 其余的細胞懸液全部轉入步驟⑵預熱的15mL離心管中，輕輕混勻。（為了減少損失的細胞數量，可以用1mL完全培養液，沖洗凍存管，再將1mL滌洗液加入離心管）。
- 將離心管擰緊，放入離心機內。離心機設置離心速度為300g，離心10分鐘。
- 離心結束后，無菌工作臺內打開離心管，用移液器盡量去除上清液，向下層沉淀物中加入1mL預熱的完全培養液，輕輕吹勻。
- 將細胞全部接種到1個100mm培養皿或T25細胞培養瓶中，加入足量的完全培養液，輕輕搖晃、混勻，使細胞均勻分布。
- 將細胞培養容器轉入5%CO2，37%，飽和濕度的培養箱中培養。
- 通常培養6-8小時，細胞開始貼壁。
- 復蘇后的第2天，顯微鏡下觀察細胞，細胞基本全部貼壁。
- 在無菌工作臺內，用移液器棄去培養容器內的培養液，更換為新鮮、37℃預熱的完全細胞培養液。
- 培養48-72小時后，細胞融合率達80%，可進行消化和傳代。
- 準備適量的細胞培養液、1×PBS磷酸鹽緩沖液（pH=7.2）、0.25%胰酶-EDTA預熱至37℃。
- 無菌工作臺內，棄去原培養容器內的培養液。
- 取5mL PBS緩沖液加入100mm細胞皿中（T25培養瓶加入3mL），輕輕滌洗細胞表面，再用移液器棄去PBS。此步驟重復2次。
- 向細胞平皿中加入2mL胰酶（T25加入1mL），輕輕晃動平皿，使胰酶充分覆蓋細胞表面。將平皿轉移至細胞培養箱，孵育2分鐘左右。
- 顯微鏡下觀察，大部分細胞呈圓形、透亮，并從平皿上脫落。
- 向平皿中加入10mL細胞培養液（胰酶與培養液體積比為1：5）終止消化。
- 用移液管吹打培養皿底面，使細胞全部從皿底脫落。吹打3-4遍即可，盡量避免氣泡的產生。
- 將細胞懸液全部轉入15mL離心管中。
- 將離心機設置離心速度為300g，離心10分鐘。
- 離心結束后，棄去上清液，向下層沉淀加入1mL細胞培養液，輕輕吹散、吹勻。
- 將細胞密度用細胞培養液稀釋至2-5×10^4/cm2傳代。
- 將細胞培養容器放入5%CO2，37%，飽和濕度的培養箱中培養。
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