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| 銷售商： 翌圣生物科技（上海）股份有限公司 | 查看該公司所有產品 >> |
Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，經基因工程改造而成。該酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的83倍，是普通Pfu DNA聚合酶的9倍。酶溶液中添加了常溫可抑制聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性的兩種單克隆抗體，可簡便地進行高特異性的Hot Start PCR，極大提高了擴增的檢出率和產物的特異性。酶溶液中添加了延伸因子使得該酶具有長片段擴增能力，擴增目的片段的長度可長達13 kb。本產品配備了優化緩沖液，使得該酶適用于復雜模板的擴增。擴增產物為平末端。
產品組分
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組分編號 |
組分名稱 |
產品規格 |
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10153ES10（10 U） |
10153ES60（100 U） |
10153ES76（500 U） |
10153ES80（1,000 U） |
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10153-A |
Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μL) |
10 μL |
100 μL |
500 μL |
500 μL×2 |
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10153-B |
2×Canace® Plus PCR buffer（含Mg2+，dNTPs） |
300 μL |
3×1 mL |
15×1 mL |
30×1 mL |
|
10153-C |
6×DNA Loading Buffer |
120 μL |
1 mL |
6×1 ml |
12×1 ml |
產品應用
基因克隆；復雜DNA模板擴增；高通量建庫。
活性定義
用活性化的大馬哈魚精子DNA為模板/引物，74°C，30 min內，攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1 U。
運輸與保存方法
冰袋運輸。-20°C保存。有效期1年。
注意事項
1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
2）本產品僅作科研用途！
推薦PCR反應體系
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組分 |
體積 |
終濃度 |
|
ddH2O |
to 50 μL |
- |
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2×Canace® Plus PCR buffer (含Mg2+，dNTPs) |
25 μL |
1× |
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DNA模板 |
適量 |
- |
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Primer正向 (10 μM) |
2 μL |
0.4 μM |
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Primer反向 (10 μM) |
2 μL |
0.4 μM |
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Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μL) |
1 μL |
1 U/50 μL |
【注】：1. 試劑使用：使用前要充分解凍混勻。
2. Mg2+終濃度：體系終濃度為2mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM為間隔向上摸索。
3. 高GC模板：在體系中加入終濃度為3%的DMSO可能有利于擴增。
4. 不同模板的推薦使用量（25 μL反應體系）：
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模板種類 |
擴增片段1 kb-10 kb |
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基因組DNA |
50 ng-200 ng |
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質�；虿《綝NA |
10 pg-20 ng |
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cDNA |
1-2.5 μL（不超過PCR反應總體積的1/10） |
PCR擴增程序：有以下三種程序可選擇，優先選擇兩步法程序。
| 兩步法程序（優先推薦）： | 三步法程序（常規程序）： | |||||||
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循環步驟 |
溫度 |
時間 |
循環數 |
循環步驟 |
溫度 |
時間 |
循環數 |
|
|
預變性 |
98°C |
3 min |
1 |
預變性1 |
98°C |
3 min |
1 |
|
|
變性 |
98°C |
10 sec |
30-35 |
變性 |
98°C |
10 sec |
30-35 |
|
|
延伸 |
68°C |
30 sec/kb |
退火2 |
60°C |
20 sec |
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|
終延伸 |
72°C |
5 min |
1 |
延伸3 |
72°C |
30 sec/kb |
||
|
終延伸 |
72°C |
5 min |
1 |
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| 梯度溫度退火程序（難擴增基因推薦程序）: | *不同擴增程序下的特點： | |||||||
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步驟 |
溫度 |
時間 |
循環數 |
程序類型 |
兩步法 |
三步法 |
梯度退火 |
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|
預變性 |
98°C |
3 min |
1 |
速度 |
最快 |
中等 |
慢 |
|
|
變性 |
98°C |
10 sec |
15，每個循環降低1℃ |
特異性 |
高 |
中等 |
高 |
|
|
梯度退火 |
70-55°C |
20 sec |
PCR產量 |
中等 |
最高 |
中等 |
||
|
延伸 |
72°C |
30 sec/kb |
檢出率 |
高 |
中等 |
高 |
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|
變性 |
98°C |
10 sec |
20 |
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|
正常退火 |
55°C |
20 sec |
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|
延伸 |
72°C |
30 sec/kb |
||||||
|
終延伸 |
72°C |
5 min |
1 |
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【注】：1. 預變性溫度和時間：推薦溫度：98°C，時間：3 min，高GC含量模板5-10 min。
2. 退火溫度和時間：推薦溫度：60°C，也可根據需要，設立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時間設置為20 sec，可以在10-30 sec內調節。退火時間太長可能導致擴增產物在膠上呈彌散狀。
3. 延伸溫度和時間：推薦溫度：72°C。時間：30 sec/kb，復雜模板根據實際情況可延長至60 sec/kb。
相關產品
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產品名稱 |
貨號 |
規格 |
|
10154ES03/08 |
1 mL/5×1 mL |
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|
10148ES60/76/80 |
100 U/500 U/1000 U |
|
|
10149ES03/08 |
1 mL/5×1 mL |
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|
Hieff CloneTM Zero TOPO-Blunt Cloning Kit 零背景TOPO-Blunt平末端克隆試劑盒HOT |
10909ES20 |
20 T |
|
Hieff CloneTM Zero TOPO-Blunt Simple Cloning Kit 零背景TOPO-Blunt平末端克隆試劑盒（不含MCS多克隆酶切位點） |
10910ES20 |
20 T |
|
10911ES20 |
20 T |
|
|
Hieff Clone® Plus Multi One Step Cloning Kit 多片段一步法快速克隆試劑盒HOT |
10912ES10 |
10 T |
|
11003ES10 |
10 T |
|
|
11004ES10 |
10 T |
