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ELISA原理是將抗原或抗體包被在固相載體上,利用抗原抗體特異性結(jié)合,檢測過程中,通常使用洗板的方式去除非結(jié)合物,最終酶促反應(yīng)后的底物的顏色,對(duì)樣本中蛋白進(jìn)行定性與定量。
1.抗體:單抗特異性強(qiáng),多抗結(jié)合性高,高端試劑盒需要高效的配對(duì)。
2.抗原:大多為重組蛋白,細(xì)胞因子和待測樣本,高效標(biāo)準(zhǔn)品需NIBSC/WHO校準(zhǔn)。
3.顯色作用體系:首先辣根過氧化物酶(HRP)與常見底物TMB和OPD均可形成顯色體系,再者堿性磷酸酶(AP)的底物為對(duì)-硝基苯磷酸酯可形成黃色底物,還有葡萄糖氧化酶(GOD)的葡萄糖氧化酶法形成特殊顯色,最后β-D-半乳糖苷(β-D-Gal)的底物為4-甲基傘酮基β-D半-乳糖苷(4MUG)可生成高強(qiáng)度熒光。