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生物發光乳腺癌細胞株MDA-MB-231
英文名稱:MDA-MB-231-luc總訪問:1789
國產/進口:國產半年訪問:68
產地/品牌:中國產品類別:細胞株/菌種
規       格:sciencelight 最后更新:2020-5-9
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  • 產品介紹
  • 公司簡介
  1. 細胞名稱   MDA-MB-231
  2. 組織  乳腺癌細胞
  3. 母細胞來源  ATCC
  4. 病毒來源 逆轉錄病毒(自制含熒光素酶和GFP的逆轉錄病毒)
  5. 轉染方法與標記過程的描述(逆轉錄病毒制備、感染與篩選)
    1. 感染前消化細胞并計數,將細胞鋪于10cm培養皿中,確保感染前細胞達到20%-30%的匯合度。
    2. 取4ml含逆轉錄病毒的培養基,加入40ul 10mg/ml的polybrene混合以0.45um濾膜過濾后加入細胞中。晃勻,37度孵化過夜。
    3. 移去含有逆轉錄病毒的培養基,加入10ml完全培養基,37度正常培養12小時。
    4. 重復2-3步,2-3個循環后用GFP的FACS篩選陽性細胞。
    5. 陽性細胞系鑒定: 取1×104細胞,用裂解液裂解,加入熒光素酶作用底物,將轉染質粒的細胞與陰性,陽性對照共同進行單報告基因檢測。
  6. 培養條件 :置于37℃、5%CO2培養箱中,用含10%胎牛血清(FBS;    GIBCO)和1%雙抗(100 U/ ml青霉素和100 μg/ ml鏈霉素,GIBCO)的高糖DMEM培養基培養,培養三天(密度大概80%)按照1:4的比例傳代。
  7. 細胞傳代所需時間:3天/代 
  8. 篩選標記維持壓力和選擇壓力:
  9. 體外實驗數據:1×104細胞裂解后,取1/4裂解液,Luciferase報告分析值在105以上。
  10. 體內實驗(進行皮下瘤或原位瘤的細胞接種條件)

裸鼠,105 -106細胞,原位注射或皮下注射,需要使用基質膠,10天左右可成瘤。尾靜脈注射大約3個月可以發生肺轉移。

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