組織凍存新技術(shù)說明 -使用流程
活腫瘤組織凍存試劑盒
組織凍存管 X3
組織支架 X3
組織凍存液：
No.1 玻璃化液 1(V1) …………. 1X10ml 管
No.2 玻璃化液 2(V2) ……….. 1X10ml 管
組織凍存流程：
清洗、處理組織→玻璃化液 1、2→液氮玻璃化→儲(chǔ)存
自備材料：
1. 生理鹽水/1XPBS
2. 眼科剪
3. 眼科鑷
4. 有齒鑷
5. 平口鑷
6. 組織處理模具及配套刀片（LT2603）
7. 無菌液氮
8. 無菌液氮盒
9. 秒表或計(jì)時(shí)器
10. 100mm 培養(yǎng)皿 X4
11. 無菌紗布
12. 水浴鍋
操作步驟：
a. 在組織凍存管上記錄清楚腫瘤組織的相關(guān)信息；
b. 水浴加熱并維持玻璃化液 1、玻璃化液 2 為 26℃； 注意：在后續(xù)使用玻璃化液 1、玻璃化液 2 時(shí)，維持液溫為 26℃，有利于提高組織復(fù)蘇后 的存活率。
c. 在 100mm 培養(yǎng)皿中，用生理鹽水清洗腫瘤組織，使用眼科剪、眼科鑷修剪 去除血管、包膜以及壞死組織；
d. 使用組織處理模具將腫瘤組織切成 1mm 厚的薄片； 注意：經(jīng)驗(yàn)證，組織切片的最佳厚度為 1mm。
e. 在 100mm 培養(yǎng)皿中，用生理鹽水再次清洗切好的組織，并用無菌紗布吸除 組織表面的液體；
f. 使用平口鑷將腫瘤組織切片浸入 V1 管中的 10ml 玻璃化液 1 中，26℃， 25min ；
g. 將 V1 管中的液體及組織切片全部倒入 100mm 培養(yǎng)皿中，在移入 V2 管前使 用無菌紗布盡量將組織表面的玻璃化液 1 吸除； 注意：盡量減少組織切片從玻璃化液 1 移入玻璃化液 2 之間的操作時(shí)間。
h. 使用平口鑷將組織切片移入 V2 管中的 10ml 玻璃化液 2 中，26℃， 15min 或 者待組織切片自然沉降至管底； 注意：如果組織切片在 15min 內(nèi)沒有自然沉降至 V2 管的管底，等待至其沉至管底；如果組織切片早于 15min 沉至管底，讓組織切片在 V2 管內(nèi)浸泡至少 15min。
i. 將組織切片平鋪擺放于組織支架上；
j. 將組織支架平放于無菌紗布上，盡量吸除組織切片表面的液體；
k. 使用有齒鑷將組織支架快速浸入無菌液氮，時(shí)間不少于 5min；
l. 快速將組織支架移入組織凍存管內(nèi)，旋緊凍存管，將凍存管移入液氮罐中保 存。
注意：在組織支架移入組織凍存管前，檢查組織切片是否透明，透明的組織切片意味著組 織切片成功被玻璃化。
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上海科遠(yuǎn)迪生物科技有限公司致力于活體動(dòng)物體內(nèi)成像技術(shù)以及相關(guān)腫瘤研究新技術(shù)在中國(guó)的推廣和應(yīng)用！人民衛(wèi)生出版社2010年出版的《高等學(xué)校創(chuàng)新教材-醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)系列》之《組織學(xué)與胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)》分冊(cè)首次將活體動(dòng)物體內(nèi)功能成像技術(shù)（該書第十一章）寫進(jìn)醫(yī)學(xué)院校教材，標(biāo)志著該技術(shù)在國(guó)內(nèi)的普及應(yīng)用又上新臺(tái)階！本公司創(chuàng)始人參與了第十一章《活體動(dòng)物體內(nèi)功能成像技術(shù)》的編寫工作！本公司與交通大學(xué)第六人民醫(yī)院合作完成的《活體生物發(fā)光成像技術(shù)及其在消化道研究領(lǐng)域中的應(yīng)用》一文發(fā)表在《胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志》2010年第四期，本項(xiàng)目由上海市自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.04ZB14072) 資助。本公司與浙江大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院李繼承教授，李冬梅博士合作完成的《小動(dòng)物活體成像技術(shù)研究進(jìn)展》一文發(fā)表在《中國(guó)生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)報(bào)》2009,28(6):916-921。
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