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采用穩定同位素標記定量的方法，能夠精確的對蛋白表達水平進行定量分析。
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非標定量技術（LFQ）
采用穩定同位素標記定量的方法，能夠精確的對蛋白表達水平進行定量分析。然而，標記定量的方法也存在某些不足之處：包括，額外的樣品處理過程，昂貴的標記試劑，不完全標記導致樣品復雜化，低豐度多肽難以檢測，可標記樣品數量有限等。作為替代，非標記定量技術（LFQ，label-free quantification）能夠避免此類缺陷。LFQ定量通常可采用兩種方式：（1）譜圖計數法（Spectral counting），使用多肽被鑒定次數來代表對應多肽的相對含量，進而計算出對應蛋白的相對表達量；（2）母離子強度（precursor ion intensity），提取鑒定到的多肽在一級質譜（MS1）中的色譜峰面積代表其相對含量，然后計算出對應蛋白的相對表達量。和標記定量技術不同在于：標記定量樣品預先混合并同時進行LC-MS/MS檢測，而LFQ技術要求每個樣品獨立進行制備和LC-MS/MS檢測，因此準確性和通量弱于標記定量技術。
圖1. Label-free定量技術原理。
技術優勢
• LFQ定量技術克服了同位素標記定量技術的諸多限制，更加靈活，適用于各種樣品；更高的靈敏度，定量更多的蛋白。
• 特異性與靈敏度兼備：基于質譜的蛋白質組學精確到單個氨基酸位點，蛋白鑒定準確，靈敏度高，是profiling分析和PTM研究的強大工具。
• 嚴格的質量控制：數據穩定、重現性好，定量動態范圍廣，多個樣品平行處理，接近標記定量的定量準確性。
• 專業的數據分析：標準的搜庫流程，專業的統計和生信分析，出版級的圖表展示，完整全面的分析報告。
樣品要求
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樣品類型 |
樣品要求 |
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蛋白質提取物 |
濃度 >1μg/μl，蛋白質總量 >200μg |
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細胞樣品 |
細胞量 >5×106 |
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組織樣品 |
動物、微生物組織濕重 >100mg |
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體液樣品 |
血液體積 >500μl，血清、血漿、腦脊液 >500μl，尿液 >50ml |
技術流程
應用領域
• 疾病標志物篩選
• 分子機制研究
• 藥物作用靶點研究
• 特殊功能蛋白質篩選
儀器平臺
Thermo Scientific EASY-nLC 1200
Thermo Scientific Q Exactive
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