獲得大量目的蛋白的最簡單最經(jīng)濟的方法是利用原核表達系統(tǒng)表達外源基因。蛋白質(zhì)一直是生物工程研究的一個重要方面,獲得大量純化的蛋白質(zhì)是蛋白質(zhì)理化性質(zhì)與功能研究的基礎(chǔ)。雖然20世紀90年代后有許多實驗室利用哺乳動物細胞來表達外源蛋白,但迄今原核的大腸桿菌表達系統(tǒng)還是最常用的,因為大腸桿菌的遺傳背景清楚,表達高效,經(jīng)濟方便。

實驗流程

1、基因優(yōu)化:靶基因序列設(shè)計,密碼子優(yōu)化并合成目的基因。

2、載體-宿主系統(tǒng)優(yōu)化:根據(jù)蛋白特性構(gòu)建表達載體,轉(zhuǎn)化質(zhì)粒到高效表達的大腸桿菌中。

3、表達條件優(yōu)化:對重組的大腸桿菌進行搖瓶培養(yǎng),并通過SDS-PAGE電泳檢測對表達條件(時間、溫度、IPTG濃度)進行嚴格控制和優(yōu)化。

4、純化蛋白:對表達的蛋白采用親和,離子或凝膠過濾層析等方法進行純化。首選上清,次選蛋白復(fù)性。對實驗用SDS-PAGE和Western Blot驗證目標蛋白純度正確性,按照客戶要求進行分裝或凍干。

客戶須知

1、無污染的質(zhì)粒,最小量不得低于100ng

2、原始質(zhì)粒圖譜及序列文件

3、插入基因后質(zhì)粒的商業(yè)測序報告

4、目標蛋白質(zhì)相關(guān)信息

5、最終蛋白一般保存在常規(guī)的緩沖液中(Tris-HCl,PBS)

6、我們提供Western Blot的檢測服務(wù)

交付標準

1、1-3mg蛋白

2、純度>70%

3、表達菌株

4、實驗報告

適用客戶

本套餐特別適用于已經(jīng)嘗試過蛋白表達小試,結(jié)果為兩種情況1、無表達或表達量偏低2、有表達但蛋白為包涵體。針對此類情況,我們的重點是優(yōu)化表達條件,提高表達量,取得可溶性表達蛋白。

服務(wù)周期      2周