熒光定量PCR服務
概述:
熒光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR,RTFQ PCR) 是1996 年由美國Applied Biosystems 公司推出的一種新定量試驗技術,它是通過熒光染料或熒光標記的特異性的探針,對PCR產物進行標記跟蹤,實時在線監控反應過程,結合相應的軟件可以對產物進行分析,計算待測樣品模板的初始濃度。
原理:
PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;剛開始時, 探針結合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步
前景:
實時熒光定量PCR的出現,極大地簡化了定量檢測的過程,而且真正實現了絕對定量。多種檢測系統的出現,使實驗的選擇性更強。自動化操作提高了工作效率,反應快速、重復性好、靈敏度高、特異性強、結果清晰。隨著生物芯片技術和熒光探針定量技術的結合,熒光定量PCR在醫學檢測及其他各個領域中的應用前景將更加廣闊,令人欣喜。盡管如此我們也應清晰認識到,FQ-PCR技術在我國各個研究領域的應用并不多見,這就需要我國學者迎頭趕上,使FQ-PCR技術更充分地推廣,以推動研究工作的快速發展。
服務項目及價格:
| 服務項目 | 服務內容 | 服務價格 | 服務周期 |
| 樣品制備 | 樣品提取反轉錄 | 130元/樣品 | 2-3周 |
| 樣品檢測 | QPCR(包含3個重復，免費內參） | 130元/樣品/基因 | 2-3周 |
| 引物合成 | SYBR GreenI法（10個樣品以上免費） | 100元/對 | 1周 |
| 探針合成 | 探針及配對引物 | 1000元/條 | 2周 |
| 標準品及曲線 | 絕對定量（標準品，標準曲線，探針） | 2000/基因 | 2周 |
| 基礎費用 | 不足10個樣品檢測基因小于2個 | 500 | --- |
| miRNA SYBR Green I 相對定量 | QPCR(包含3個重復，免費內參） | 200元/樣品/基因 | 2-3周 |
一般情況下,3周左右可完成實驗!若遇特殊原因,比如實驗材料降解,需要重新提供樣品或者總RNA需要重新提取;基因表達量較低,需要構建標準品等情況,周期會有所延長。
MiRNA定量PCR
MicroRNAs(miRNAs)是一類長度約20-24nt的非編碼單鏈RNA,在細胞增殖、凋亡、器官發生、發育、造血以及腫瘤發生等若干途徑中發揮重要作用。miRNA表達的定量分析是生物功能研究的基礎,細胞、組織或血液中的miRNA的檢測有助于發現新的早期診斷和預測療效及患者預后的生物標志物。本公司提供優質的miRNA實時熒光定量PCR全套技術服務。
實驗流程
1.miRNA提取。
2.利用加尾法將RNA逆轉錄成cDNA。
3.隨機選擇一個樣品進行預實驗,篩選引物,優化程序。
4.熒光定量PCR正式試驗。
5.提交報告,原始Ct值。
服務內容
1.相對定量:以U6 或5S rRNA為內參,檢測樣本中相關miRNA的相對表達量。
2.絕對定量:以化學合成的miRNA成熟鏈為標準品,做5個或5個以上梯度點的稀釋后制作標準曲線,通過標準曲線對樣品進行相關miRNA絕對定量檢測。
樣品要求
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材料種類 |
樣品要求 |
起始量 |
保存及運輸方式 |
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血液 |
新鮮血液及抗凝劑處理的全血 |
1ml |
加入Trizol-80℃貯存，干冰運輸 |
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培養細胞 |
離心收集的細胞 |
1x107 |
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動物組織 |
一般材料 |
100mg |
-80℃或者液氮貯存，干冰運輸 |
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植物 |
一般材料 |
100mg |
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RNA |
OD260/OD280在1.9-2.1之間，完整性好 |
>5ug |
-80℃貯存，干冰運輸 |
最終產品
相應引物(加尾法上游引物和通用引物;莖環法引物)及序列。
完整實驗報告。
服務說明
客戶需提供miRNA的準確名稱
