平板細胞克隆形成試驗

克隆形成試驗可反映細胞群體依賴性和增殖能力。一般細胞在體外增殖六代以上,其后代形成的細胞群體稱為細胞集落或克隆。每個克隆由單一細胞而來,含有50個以上細胞,大小在0.3-1mm之間。通過克隆形成可檢測各種理化因素對細胞克隆形成能力的影響。平板克隆形成試驗可檢測貼壁細胞細胞的克隆形成能力,軟瓊脂集落形成試驗可檢測非錨著依賴生長的細胞,如骨髓造血干細胞、腫瘤細胞株、轉化細胞系等。

基本步驟:

1、取對數生長期的各組細胞,分別用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成單個細胞,并把細胞懸浮在10%胎牛血清的DMEM培養液中備用。

2、將細胞懸液作梯度倍數稀釋,每組細胞分別以每皿50、100、200個細胞的梯度密度分別接種含10mL 37℃預溫培養液的皿中,并輕輕轉動,使細胞分散均勻。置37℃ 5% CO2及飽和濕度的細胞培養箱中培養2～3周。

3、經常觀察,當培養皿中出現肉眼可見的克隆時,終止培養。棄去上清液,用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定細胞5mL固定15分鐘。然后去固定液,加適量GIMSA應用染色液染10～30分鐘,然后用流水緩慢洗去染色液,空氣干燥。

4、將平皿倒置并疊加一張帶網格的透明膠片,用肉眼直接計數克隆,或在顯微鏡(低倍鏡)計數大于10個細胞的克隆數。最后計算克隆形成率。

克隆形成率 =(克隆數/接種細胞數)×100%

服務流程:

1) 項目方案的確定,包括目的細胞、細胞處理方式及處理時間等。

2) 細胞培養

3) 克隆形成實驗

4) 克隆形成實驗圖片及實驗報告

服務周期：3～5周