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HILIC-UHPLC分析N-聚糖鍵分析服務
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服務類別:分子與細胞總訪問:196
最后更新:2023-11-16半年訪問:17
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糖苷鍵很少對糖蛋白的功能產生影響,因此通常不需要確定。然而,糖蛋白的聚糖結構高度復雜,評估N-糖的糖苷鍵的構型和位置對分析糖蛋白的結構是有幫助的。已知有五種常見的N-聚糖鍵,最常見的是N-乙酰氨基葡糖與天冬酰胺(GlcNAcβ1-Asn)連接。與Asn連接的其他類型包括:哺乳動物和古生菌的層粘連蛋白中的葡萄糖,古生菌中的N-乙酰半乳糖胺(GalNAc),鼠李糖素細菌。也有報告顯示,葡萄糖在甜玉米中與精氨酸連接。

HILIC-UHPLC分析N-聚糖鍵

N-聚糖通過N-糖苷酶F(Peptide N Glycosidase F,PNGase F)反應從糖蛋白中水解出來。水解的N-聚糖用2-氨基苯甲酰胺(2-AB)標記,然后用多種外切糖苷酶消化。最后,通過親水相互作用色譜法(HILIC)結合熒光和質譜檢測對聚糖進行分析。

N-聚糖鍵分析一般步驟

1. 樣品制備
2. N聚糖水解
3. 2-AB標記和標記的聚糖與一系列外切糖苷酶順序反應
4. 基于UPLC-HILIC-FLD的分析
5. 此外,可以通過MS/MS片段確定詳細的聚糖結構

內切糖苷酶的作用:
內切糖苷酶能從糖蛋白或糖脂中水解寡糖。通常它不會從結合的蛋白質和脂質分子中水解寡糖。內切糖苷酶通過破壞聚合物中兩個糖單體之間的糖苷鍵起作用。
內切糖苷酶H:水解低聚甘露糖和雜合N-聚糖
內切糖苷酶F:水解簡單的二價N-聚糖

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