糖基化主要是指將聚糖連接到蛋白質、脂質或其他有機分子上的酶促過程，是最常見的蛋白質翻譯后修飾（PTM）。由于連接的聚糖的復雜性和同量異位性質，糖基化分析十分具有挑戰性。隨著蛋白質治療劑在臨床實踐中的應用增多，如單克隆抗體、糖蛋白、激素、細胞因子和凝血因子，蛋白質N-糖基化（也稱作N聚糖，N糖）的檢測受到越來越廣泛的關注。
不同生物內產生的不同類型的N-聚糖
N糖（N-Glycan）是一種含有Man3-GlcNAc2的寡糖結構，它們通過末端N-乙�；咸前罚℅lcNAc）和天冬酰胺的NH2基團之間的糖苷鍵與蛋白質的多肽鏈連接。大多數聚糖分析的樣品制備步驟包括糖蛋白的消化、去糖基化、純化、標記/衍生化和SPE。根據樣品的特性，也可以使用其他步驟和技術進行樣品制備。
N糖鏈分析的一般流程（以抗體為例）
可利用MALDI TOF MS和/或UHPLC技術，對聚糖及其種類進行分析。
基于MALDI-TOF MS技術的N聚糖分析MALDI-TOF對糖基化化合物的結構表征具有很高的靈敏度，且可實現高通量檢測。在對混合物N糖進行分析時，MALDI通過單電荷離子的形成對樣品進行分析，而不是電噴霧電離進行分析。使用N-糖苷酶A或F酶促反應，釋放樣品的N糖后，將樣品甲基化后進行檢測。
基于質譜的N糖鏈分析
基于HILIC-UHPLC MS技術的N糖譜（N-Glycan profiling）分析基于LC-MS的N糖分析是現在的主流分析方法，親水相互作用色譜法（HILIC）可用于N糖分析，PNGase F酶促反應釋放的N糖，利用2-氨基苯甲酰胺(2-AB) 對釋放所得的糖鏈進行衍生化，對衍生后的糖鏈進行測定，可用于大量樣本N糖的分析。在進行熒光標記之前，如果存在大量可能干擾衍生化反應的去污劑、非揮發性鹽或帶有游離氨基的物質，可通過TSK Amide-80色譜柱對N糖進行純化。標記后的N糖通過HILIC-UHPLC MS進行分析。
利用HILIC色譜柱進行N-聚糖分析的常規流程
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1. 實驗步驟（中英文）
2. 相關的質譜參數（中英文）
3. 質譜圖片
4. 原始數據
5. N-糖分析結果
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