文庫構建服務——cDNA文庫構建
詳細描述:
一. SMART cDNA 文庫構建
以總RNA為模板,采用SMART方法將mRNA在體外反轉錄成cDNA,與適當質粒載體連接后轉化受體菌,則每個細菌含有一段cDNA,并能繁殖擴增,這種包含著細胞全部mRNA信息的cDNA克隆群體稱為某組織或細胞的cDNA文庫。美吉生物具有眾多的SMART cDNA文庫構建成功案例,可以構建不同材料來源的cDNA文庫。
文庫特點
1. 材料用量少:只需1 μg總RNA。
2. 全長比率高:采用Clontech SMART專利技術,全長比率一般在30%以上。
3. 實驗周期短:最快2~3周即可完成整個文庫構建。
提供結果
1. 產物電泳圖譜
2. 文庫連接液,保存于-20℃
3. 文庫評價數據,包括庫容量,插入片段平均長度,重組效率,cDNA完整性評價等
4. 實驗報告
應用領域
1. 物種種質資源開發與保護
2. 物種遺傳功能分析
3. 基因克隆與表達
4. 新基因的發現
5. 功能基因的篩選
二. 抑制性消減雜交 cDNA 文庫技術( SSH )
抑制性消減雜交文庫技術結合了抑制消減雜交、基因文庫和斑點雜交等多種技術,能高效篩選出差異表達基因。與傳統的DD-PCR、SAGE及cDNA-RDA等技術相比,具有低豐度mRNA富集率高、假陽性低、靈敏度高、重復性好等特點。該技術尤其適用于Genome尚不完全清晰的物種及某些特殊生物材料的研究。
服務項目
1. Clontech SSH文庫(差異基因片段文庫)
2. cDNA消減文庫(差異基因cDNA文庫)
3. SMART cDNA消減文庫(差異基因全長cDNA文庫)
技術特點
1. 只需要0.5~2 μg的mRNA或最低只需50ng的總RNA。
2. 可以在物種遺傳信息未知的情況下,進行多樣本差異基因高通量篩選,尤其適用于非模式生物(植物\昆蟲\魚類等)的研究。具有通量差異的基因以克隆形式得以保存,便于后續研究(測序、RACE、引物設計等)。
提供結果
1. SSH差減文庫(PCR產物)
2. 逆向斑點雜交篩選到的差異表達基因的實物克隆及序列信息(如合作伙伴要求測序)
3. 實驗報告:構建過程說明、圖片、質控信息
三. 均一化 cDNA 文庫構建
構建均一化cDNA文庫,使文庫中各表達基因所對應的cDNA拷貝數相等或接近,能有效克服基因轉錄水平上的巨大差異給文庫篩選和分析帶來的障礙,有利于研究基因的表達和序列分析。通過構建均一化文庫,以獲得更全面的基因信息,可以節省大量的測序費用,性價比高。美吉生物采用先進的cDNA文庫均一化技術,能減少高豐度表達基因10~100倍,有效富集低豐度表達基因,從而大大降低了數據冗余率。
文庫特點
1. 材料用量少,文庫構建只需1μg總RNA。
2. 技術成熟,均一化程度高,無需反復雜交過程。
3. 均一化過程對插入片段大小無明顯影響。
4. 均一化后,減低高豐度表達基因10~100倍。
提供結果
1. 文庫連接液,保存在-20℃
2. 實驗報告:文庫評價數據(庫容量,插入片段平均長度,重組效率,cDNA完整性評價, 冗余度評價)、實驗流程、產物電泳圖譜及均一化前后管家基因對比圖
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上海美吉生物醫藥科技有限公司專注于新一代DNA高通量測序技術的應用和推廣、生物信息分析、臨床診斷試劑盒研發和轉化醫學研究,是上海張江高科技園區、張江藥谷重點支持企業,華東師范大學戰略合作單位。目前,美吉生物在上海、北京、廣州三個一線城市建立了實驗基地,銷售網絡遍布全國各地。
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