產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
Ø ATP檢測(cè)試劑盒可以用于檢測(cè)細(xì)胞或組織內(nèi)的ATP (adenosine 5’-triphosphate) 水平。ATP，作為最重要的能量分子在細(xì)胞的各種生理、病理過(guò)程中起著重要作用。ATP水平的改變，會(huì)影響許多細(xì)胞的功能。通常細(xì)胞在凋亡、壞死或處于一些毒性狀態(tài)下，ATP水平會(huì)下降，而高葡萄糖刺激等對(duì)于一些細(xì)胞可以上調(diào)細(xì)胞內(nèi)ATP水平。通常ATP水平的下降表明線粒體的功能受損或下降，在細(xì)胞凋亡時(shí)ATP水平的下降通常和線粒體的膜電位下降同時(shí)發(fā)生。
Ø 本試劑盒根據(jù)螢火蟲(chóng)熒光素酶 (firefly luciferase) 催化熒光素產(chǎn)生熒光時(shí)需要ATP提供能量研制而成。當(dāng)螢火蟲(chóng)熒光素酶和熒光素都過(guò)量時(shí)，在一定的濃度范圍內(nèi)熒光的產(chǎn)生和ATP的濃度成正比。這樣就可以高靈敏地檢測(cè)溶液中的ATP濃度。本檢測(cè)試劑盒可以檢測(cè)濃度低達(dá)0.1 nmol/L的ATP。而常規(guī)的細(xì)胞或組織裂解液中ATP的濃度僅為0.1-1 µmol/L，一些常見(jiàn)細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)ATP水平約為10 nmol/mg蛋白。
Ø 檢測(cè)ATP濃度時(shí)，對(duì)于細(xì)胞和組織用本試劑盒提供的裂解液裂解后即可以測(cè)定ATP濃度。
Ø 本試劑盒方便快捷，通常10-20個(gè)樣品可以在30-60分鐘內(nèi)測(cè)定完畢。
Ø 本試劑盒至少可以檢測(cè)200個(gè)樣品。

包裝清單：
ATP檢測(cè)試劑 20ml
ATP標(biāo)準(zhǔn)溶液 1 ml
ATP檢測(cè)裂解液 100ml
說(shuō)明書(shū) 1 份

保存條件：
-20℃保存，一年有效。ATP檢測(cè)試劑需避光保存。

注意事項(xiàng)：
Ø ATP檢測(cè)試劑中含有熒光素酶，反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致其逐漸失活。為取得最佳的使用效果，盡量避免過(guò)多的反復(fù)凍融�？梢赃m當(dāng)分裝后使用。
Ø ATP，特別是裂解后樣品中的ATP在室溫不太穩(wěn)定，需在4℃或冰上操作。ATP在冰上可以穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá)6小時(shí)。
Ø 測(cè)定時(shí)，需檢測(cè)熒光素酶報(bào)告基因時(shí)所用的luminometer或液閃儀。
Ø 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說(shuō)明：
1.樣品測(cè)定的準(zhǔn)備：
如果是貼壁細(xì)胞，按照6孔板每孔加入200微升裂解液的比例（即細(xì)胞培養(yǎng)液量的1/10）加入裂解液。如果是懸浮細(xì)胞，離心收集
細(xì)胞后，也按照6孔板每孔加入200微升裂解液的比例（即細(xì)胞培養(yǎng)液量的1/10）加入裂解液。如果是組織，需適當(dāng)勻漿后再用裂解液裂解。樣品裂解需在4℃或冰上操作。
2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定的準(zhǔn)備：
把ATP標(biāo)準(zhǔn)溶液用ATP檢測(cè)裂解液稀釋成適當(dāng)?shù)臐舛忍荻�。具體的濃度需根據(jù)樣品中ATP的濃度而定。
3. ATP濃度的測(cè)定：
(1) 把ATP檢測(cè)試劑在冰上或冰水浴上融解。加100微升ATP檢測(cè)試劑到檢測(cè)孔或檢測(cè)管內(nèi)。室溫放置3-5分鐘，以使本底性的ATP全部被消耗掉，從而降低本底�？梢园�10-20個(gè)檢測(cè)孔或檢測(cè)管一起分別加上100微升ATP檢測(cè)試劑，從而節(jié)省時(shí)間。
(2) 在檢測(cè)孔或檢測(cè)管內(nèi)加上10-100微升樣品或標(biāo)準(zhǔn)品，迅速用槍（微量移液器）混勻，至少間隔2秒后，立即用luminometer 或液閃儀測(cè)定RLU值或CPM。（如果樣品中的ATP濃度比較低則可以加100微升樣品，如果樣品中ATP濃度比較高則可以加較小體積的樣品，同時(shí)標(biāo)準(zhǔn)品的也需要使用相同的體積。如果樣品中ATP的濃度特別高，可以用MiliQ級(jí)的純水或重蒸水稀釋樣品后再測(cè)定，這樣ATP標(biāo)準(zhǔn)液也要作類似于樣品的稀釋，保證檢測(cè)時(shí)標(biāo)準(zhǔn)品中ATP檢測(cè)裂解液的含量和樣品一致。本試劑盒在加100微升樣品時(shí)，大致在0.1nmol/L-100nmol/L的濃度范圍內(nèi)有很好的線性關(guān)系。）
(3) 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中ATP的濃度。
(4) 為了消除樣品制備時(shí)由于蛋白量的差異而造成的誤差，可以用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定樣品中的蛋白濃度。然后把ATP的濃度換算成nmol/mg蛋白的形式。