產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Ø 碧云天生產(chǎn)的哺乳動(dòng)物基因組DNA抽提試劑盒(Mammalian genomic DNA extraction kit)，采用了經(jīng)典的蛋白酶K處理法，可
以抽提到100-150kb以上的基因組DNA。
Ø 用本試劑盒抽提到的基因組DNA適用于Southern雜交、基因組DNA的PCR擴(kuò)增及基因組DNA文庫(kù)的構(gòu)建等。
Ø 通常使用本試劑盒，從20毫克組織可以抽提到約40微克基因組DNA，從106-107Hela細(xì)胞可以抽提到約5-50微克基因組DNA。

Ø 本試劑盒足夠抽提50個(gè)常規(guī)量的樣品。



包裝清單：

樣品裂解液 30毫升
蛋白酶K 130微升
10M 醋酸銨 6毫升
Nuclease Free Water 6毫升
說(shuō)明書(shū) 1份




保存條件：

-20℃保存，一年有效。



注意事項(xiàng)：

Ø 需自備Tris平衡苯酚、氯仿和無(wú)水乙醇。Tris平衡苯酚可以向碧云天訂購(gòu)。


Ø 如果打算抽提到大片斷的基因組DNA，則要盡量避免基因組DNA的物理性剪切。例如避免劇烈振蕩含有基因組DNA的樣品，可以用


剪掉槍頭尖的槍頭吸取含有基因組DNA的樣品。
Ø 不可過(guò)分干燥基因組DNA沉淀，否則會(huì)極難溶解。
Ø 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說(shuō)明：

1.
樣品收集


a) 對(duì)于組織樣品：
切下組織，并剪切成小塊，置液氮中凍結(jié)，研碎或搗碎。
b) 對(duì)于貼壁細(xì)胞：
胰酶消化后，PBS或生理鹽水洗一次，1000-2000g離心1-2分鐘，棄上清，收集細(xì)胞。
c) 對(duì)于懸浮細(xì)胞：
1000-2000g離心1-2分鐘，棄上清，收集細(xì)胞。
2. 基因組DNA抽提

a) 樣品處理完畢后，每1毫升樣品裂解液中加入5微升蛋白酶K，混勻。
b) 對(duì)于上述處理好的樣品，每20毫克組織或106-107個(gè)細(xì)胞中加入500微升添加了蛋白酶K的樣品裂解液，顛倒混勻數(shù)次，充
分裂解組織或細(xì)胞。

c) 50℃水浴消化過(guò)夜。

d) 加入500微升Tris平衡苯酚抽提樣品。
e) 吸出酚相及中間相(可以吸除少量靠近中間相的水相液體)，剩余的水相用等體積Tris平衡酚再抽提一次。
f) 吸出酚相及中間相 (可以吸除少量靠近中間相的水相液體)，剩余的水相用等體積氯仿再抽提一次。
g) 吸出約300微升上清液，加入60微升10M醋酸銨和600微升無(wú)水乙醇，顛倒數(shù)次混勻，此時(shí)可見(jiàn)DNA沉淀產(chǎn)生。

h) 10, 000g離心1分鐘，棄上清。加入70%乙醇洗滌DNA沉淀兩次。
i) 盡量吸除殘余的乙醇，待看不到明顯的液體時(shí)，立即加入50-100微升Nuclease Free Water溶解DNA。 注意：不可過(guò)分

干燥基因組DNA沉淀，否則會(huì)極難溶解。如果發(fā)現(xiàn)DNA沉淀難以溶解，可以在4℃用搖床緩慢搖動(dòng)過(guò)夜，以溶解DNA沉淀。