產品簡介：

Ø 碧云天生產的Annealing Buffer for DNA Oligos(5X)，即DNA寡核苷酸退火緩沖液，是一種經過我們多次實驗證實、可以

用于DNA oligo退火的緩沖液。該退火緩沖液不僅可以用于常規的DNA oligo的退火，而且特別適合于較難退火的用于RNAi(也
稱siRNA)質粒構建的DNA oligo的退火。用于RNAi質粒構建的DNA oligo通常由于含有約20個左右的互補序列，極易自身形成
發夾結構，從而影響兩條DNA oligo的正確退火。使用碧云天生產的Annealing Buffer for DNA Oligos(5X)，可以有效避免
DNA oligo自身形成發夾結構，并且兩條oligo退火后可以直接和經酶切、純化的質粒連接。通常轉化后可以得到大量的陽性克
隆。
Ø 使用本試劑盒操作非常簡單，只需把待退火的DNA oligo和Annealing Buffer for DNA Oligos(5X)按照一定比例混合后，置
于PCR儀上，約90分鐘即可完成。
Ø 如果一次退火反應體積為100微升，一個包裝的退火緩沖液可以進行50次退火反應。



包裝清單：

Annealing Buffer for DNA Oligos(5X) 1 ml
說明書 1 份




保存條件：

-20℃保存，一年有效。



注意事項：

Ø Annealing Buffer for DNA Oligos(5X)只適合于DNA oligo的退火，不能用于RNA oligo的退火。
Ø 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。



使用說明：

1.
把待退火的DNA oligo用經滅菌的MiliQ水或重蒸水配制成50μM。溶解Annealing Buffer for DNA Oligos(5X)，混勻備用。


2. 如下設置退火反應體系：
Nuclease-Free Water 40μl

Annealing Buffer for DNA Oligos(5X) 20μl

DNA oligo A(50μM) 20μl
DNA oligo B(50μM) 20μl
總體積 100μl


按照上述順序依次加入各種試劑，混勻。如果所用的PCR儀沒有熱蓋，滴加礦物油(mineral oil)以防止蒸發。

3. 如下設置PCR儀進行退火反應：
步驟 溫度 時間 說明
1 95℃ 2分鐘 讓oligo充分變性
2 每8秒下降0.1℃，降至25℃(注1) 約90分鐘 退火
3 4℃ 長時間保持 暫時存放

注1：如果所用的PCR儀不具備下降0.1℃的功能，也可以設置為每90秒下降1℃。
4. 退火結束后可以直接用于連接反應，也可以在-20℃凍存備用。如果退火結束后打算進行酶切等其它反應，最好用純化試劑盒進
行純化，或者確保退火產物在反應體系中體積不超過5%，以避免Annealing Buffer對后續的酶反應體系的干擾。