產品簡介：

Ø 神經氨酸酶抑制劑篩選試劑盒(Neuraminidase Inhibitors Screen Kit)是一個用熒光法快速高靈敏度高通量篩選神經氨酸酶

抑制劑的試劑盒。也是我們所知的全世界第一個神經氨酸酶抑制劑篩選試劑盒。
Ø 禽流感病毒在其外殼上有兩種糖蛋白，一種是haemagglutinin，簡稱HA，另一種是neuraminidase，簡稱NA，也稱唾液酸酶

(sialidase)。目前治療H5N1型禽流感的藥物包括瑞士羅氏制藥公司生產的Oseltamivir(Tamifu，達菲為其商品名)和葛蘭素史
克公司(GlaxoSmithKline)生產的Zanamivir(Relenza，瑞樂砂為其商品名)，這兩種藥物都是neuraminidase的抑制劑。但達
菲價格昂貴，普通百姓很難承受。并且達菲生產能力有限，如果發(fā)生較大規(guī)模的禽流感疫情，該藥物的供給量有限。另外，最近
在越南發(fā)生的禽流感疫情中已經發(fā)現了達菲耐受的禽流感病毒，在達菲的臨床測試中就發(fā)現存在一些對達菲耐受的禽流感病毒。
Zanamivir不能口服，使應用范圍受到限制。 因此，尋找新的神經氨酸酶抑制劑作為治療禽流感的藥物非常迫切。希望本試劑盒
能協(xié)助一些禽流感研究專家尋找到更好的價廉物美的禽流感藥物。
Ø 試劑盒中提供了純化的神經氨酸酶和可以被神經氨酸酶催化產生熒光的底物，并且對神經氨酸酶的用量和底物的使用量進行了優(yōu)

化。不僅能檢測出IC50很低的抑制劑，也能檢測出IC50較高的抑制劑。
Ø 本試劑盒可以篩選溶解于水的抑制劑，也可以篩選溶解于甲醇、乙醇、DMSO的抑制劑。其它溶劑未經測試。

Ø 本試劑盒所用的neuraminidase不是禽流感病毒來源的，但和禽流感病毒H5N1來源的neuraminidase高度保守。適合于初步大規(guī)

模篩選神經氨酸酶抑制劑。更加精確的測定需使用碧云天的H5N1神經氨酸酶抑制劑鑒定試劑盒。
Ø 一個包裝的本試劑盒可以檢測100個樣品或標準品。




包裝清單：

產品編號 產品名稱 包裝
P0309-1 神經氨酸酶檢測緩沖液 10ml
P0309-2 神經氨酸酶 1ml
P0309-3 神經氨酸酶熒光底物 1ml
P0309-4 Milli-Q水 1.2ml
— 說明書 1 份




保存條件：

-20℃保存，半年有效。




注意事項：

Ø 神經氨酸酶和神經氨酸酶熒光底物盡量避免反復凍融。

Ø 試劑盒中所用溶液溶解后4℃保存，兩天有效。如果兩天內不能全部用完，建議盡早把留作以后使用的神經氨酸酶和神經氨酸酶

熒光底物適當分裝后-70℃保存，-20℃凍存也可，但有效期會較短。其余試劑直接-20℃或-70℃保存即可。
Ø 需使用熒光酶標儀，并需自備專門用于熒光酶標儀熒光檢測的96孔熒光酶標板。或使用可以檢測小體積樣品的熒光分光光度計。


使用熒光分光光度計時參考熒光酶標板的操作方法。
Ø 由于熒光檢測非常靈敏，測定出來的熒光強度有時容易產生波動。一方面要避免灰塵等掉入檢測孔中產生熒光干擾，另一方面所


有檢測最好在同一塊檢測板上做雙份平行檢測甚至三份平行檢測。
Ø 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。


使用說明：

1. 標準曲線檢測的準備(參考表1)：

a.
在96孔熒光酶標板內每孔加入70微升神經氨酸酶檢測緩沖液。


b. 每孔再分別加入0、1、2、5、7.5、10微升神經氨酸酶。

c. 每孔再加入0-20微升Milli-Q水使每孔總體積為90微升。

2. 樣品檢測的準備(參考表1)：

a. 在96孔熒光酶標板內每孔加入70微升神經氨酸酶檢測緩沖液。

b. 每孔再加入10微升神經氨酸酶。

c. 每孔再加入0-10微升待篩選的神經氨酸酶抑制劑樣品。
d. 每孔再加入0-10微升Milli-Q水使每孔總體積為90微升。

3. 檢測(參考表1)：
a. 振動混勻約1分鐘。

b. 37℃孵育2分鐘使抑制劑和神經氨酸酶充分相互作用，做標準曲線的樣品也一起孵育。

c. 每孔加入10微升神經氨酸酶熒光底物。

d. 再振動混勻約1分鐘。

e. 37℃孵育20分鐘后進行熒光測定。激發(fā)波長為360nm，發(fā)射波長為440nm。

如果所用的熒光酶標儀的靈敏度較高，37℃孵育10分鐘后即可進行熒光測定。如果所用的熒光酶標儀的靈敏度較低，可以在孵育

30分鐘或60分鐘后進行熒光測定。由于反應是連續(xù)進行的，可以在不同時間點進行測定，以確定適合您的檢測體系的最佳孵育時
間。
表1

標準曲線 樣品
神經氨酸酶檢測緩沖液 70微升 70微升
神經氨酸酶 0-10微升 10微升
待測樣品 － 0-10微升
Milli-Q水 0-20微升 0-10微升
神經氨酸酶熒光底物 10微升 10微升
總體積 100微升 100微升

4. 計算：
根據標準曲線可以計算出樣品對于神經氨酸酶的抑制百分比。對檢測出來的有效的抑制劑，做適當的濃度曲線就可以測定出該抑
制劑的IC50。