產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
 免疫熒光染色試劑盒(Immunol Fluorence Staining Kit)系列是碧云天開發(fā)的用于細(xì)胞或組織切片免疫熒光染色的試劑盒。在有適當(dāng)?shù)囊豢箼z測(cè)特定的目標(biāo)蛋白時(shí)，就可以使用免疫熒光染色試劑盒檢測(cè)到紅色、綠色或藍(lán)色熒光。
 免疫熒光染色試劑盒－抗人FITC (Immunol Fluorence Staining Kit with FITC-Labeled Goat Anti-Human IgG)，含有FITC標(biāo)記的山羊抗人IgG (H+L)抗體，可以用于檢測(cè)人來(lái)源的相應(yīng)一抗，觀察到的顏色為非常鮮艷的綠色。
 FITC是一種常用的綠色熒光探針。FITC的發(fā)射和吸收峰參見下表。
Fluorophore Absorption Peak (nm) Emission Peak (nm)
FITC 492 520
 本試劑盒提供了含有熒光標(biāo)記抗體穩(wěn)定劑的免疫熒光染色二抗稀釋液，可以確保熒光標(biāo)記抗體稀釋后在4℃可以保存長(zhǎng)達(dá)6個(gè)月，并且在6個(gè)月內(nèi)至少可以重復(fù)使用10次。
 本試劑盒含有抗熒光淬滅封片液，可以使熒光更加持久。
 本試劑盒對(duì)于六孔板內(nèi)的細(xì)胞樣品或常規(guī)切片，至少可以檢測(cè)300個(gè)樣品。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品名稱 包裝
P0166-1 抗人FITC 0.03ml
P0166-2 免疫熒光染色二抗稀釋液 50ml
P0166-3 抗熒光淬滅封片液 15ml
— 說(shuō)明書 1份
保存條件：
-20℃保存，一年有效。同時(shí)抗人FITC需避光保存。
注意事項(xiàng)：
 需熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡。
 在使用抗熒光淬滅封片液的情況下可以減緩淬滅，但仍宜盡量避光，特別是需要盡量縮短在熒光顯微鏡下的觀察時(shí)間。
 熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，染色后宜盡快進(jìn)行熒光顯微鏡下的觀察。如果不能及時(shí)觀察可以4℃避光保存，但存放時(shí)間通常不宜超過(guò)一周，隨著存放時(shí)間的延長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致觀察效果越來(lái)越差。
 免疫熒光染色效果的好壞和一抗的關(guān)系非常密切。建議選購(gòu)有較多文獻(xiàn)報(bào)道的并注明可以用于免疫熒光染色的一抗用于本實(shí)驗(yàn)。
 如果觀察時(shí)發(fā)現(xiàn)熒光過(guò)弱，可以適當(dāng)提高一抗的濃度；如果熒光還是比較弱，可以適當(dāng)提高熒光標(biāo)記抗體的濃度。
 需自行配制用于免疫熒光染色的相關(guān)試劑，需自備蓋玻片和載玻片(可以向碧云天訂購(gòu))。
 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說(shuō)明：
1. 免疫熒光染色的準(zhǔn)備工作：
A. 固定液的準(zhǔn)備：
推薦使用碧云天生產(chǎn)的免疫染色固定液(P0098)，也可以用4%多聚甲醛作為固定液，或根據(jù)特定的一抗或樣品采用有效成分為乙醇、甲醇或其它類型的固定液。
B. 洗滌液的準(zhǔn)備：
推薦使用碧云天生產(chǎn)的免疫染色洗滌液(P0106)，也可以按照如下方法配制TBSTx作為洗滌液：
10XTBS的配制：稱取24.2g Tris (Tris堿), 80g NaCl；用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.6，定容至一升。
TBS配制：把10XTBS按照1:9的比例用水稀釋至1X即為TBS。
TBSTx的配制：在TBS中加入Triton X-100使最終濃度為0.1％ ，混勻，即為TBSTx。
C. 封閉液的準(zhǔn)備：
推薦使用碧云天生產(chǎn)的免疫染色封閉液(P0102)，也可以按照如下方法配制含5%BSA的TBSTx作為封閉液：
含5%BSA的TBSTx的配制：在100毫升TBSTx中加入5克BSA，溶解并混勻，即為含5%BSA的TBSTx。
D. 一抗稀釋液的準(zhǔn)備：
推薦使用碧云天生產(chǎn)的免疫染色一抗稀釋液(P0103)，也可以使用上述封閉液，即含5%BSA的TBSTx，作為一抗稀釋液。
E. 一抗的稀釋：
按照一抗說(shuō)明書中推薦的用于免疫熒光染色的稀釋比例用一抗稀釋液稀釋一抗。
F. 熒光標(biāo)記二抗的稀釋：
把熒光標(biāo)記的二抗，按照1:1000的比例用本試劑盒提供的免疫熒光染色二抗稀釋液進(jìn)行稀釋。根據(jù)熒光的強(qiáng)弱，稀釋的比例可以適當(dāng)提高或降低。
2. 對(duì)于貼壁細(xì)胞：
A. 取普通潔凈蓋玻片于70%乙醇中浸泡5分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間，無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)吹干或用細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)PBS或0.9%NaCl等溶液洗滌三遍，再用細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌一遍。將蓋玻片置于六孔板內(nèi)，種入細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)夜，使約為50%-80%滿。
B. 按照特定的實(shí)驗(yàn)?zāi)康奶幚砑?xì)胞后，吸盡培養(yǎng)液，加入1ml固定液，固定10分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間(可4℃固定過(guò)夜)。
C. 去固定液，用洗滌液洗3次，每次3-5分鐘，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。
D. 用封閉液封閉60分鐘，可以在搖床上輕輕搖動(dòng)。
E. 去封閉液，用稀釋的特定一抗作用60分鐘，可以在搖床上輕輕搖動(dòng)。為增強(qiáng)與一抗的結(jié)合，可以4℃作用過(guò)夜。
F. 去除一抗，用洗滌液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。每次洗滌時(shí)都可以在搖床上輕輕搖動(dòng)。
G. 去除洗滌液，加入1毫升稀釋好的熒光標(biāo)記的二抗作用60分鐘，可以在搖床上輕輕搖動(dòng)。
H. 回收熒光標(biāo)記的二抗，用洗滌液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。每次洗滌時(shí)都可以在搖床上輕輕搖動(dòng)。
I. 滴一滴本試劑盒提供的抗熒光淬滅封片液于載玻片上，蓋上貼有細(xì)胞的蓋玻片，盡量避免氣泡。使細(xì)胞接觸封片液，切勿弄反。
J. 如果一抗選用適當(dāng)，在熒光顯微鏡下可以觀察到綠色的熒光。
3. 對(duì)于懸浮細(xì)胞：
A. 離心收集細(xì)胞樣品于1.5ml離心管內(nèi)，吸除上清后輕輕彈散細(xì)胞。
B. 加入0.5ml固定液，緩緩懸起細(xì)胞，固定10分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間(可4℃過(guò)夜)。
C. 離心去固定液，用洗滌液洗3次，每次3-5分鐘。洗滌期間可以用手或搖床輕輕晃動(dòng)。
D. 最后一次離心后吸去大部分液體保留約50微升液體，再緩緩懸起細(xì)胞，滴加至載玻片上，盡量使細(xì)胞分布均勻。
E. 稍晾干，使細(xì)胞貼在載玻片上不易隨液體流動(dòng)。條件許可的，可以使用適當(dāng)?shù)碾x心機(jī)，通過(guò)離心把細(xì)胞貼緊在載玻片上。
F. 用封閉液封閉60分鐘。封閉及后續(xù)的操作可以用碧云天的染色缸和染色架或郵寄夾進(jìn)行操作。
G. 去封閉液，用稀釋的特定一抗作用60分鐘。為增強(qiáng)與一抗的結(jié)合，可以4℃作用過(guò)夜。
H. 去除一抗，用洗滌液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。
I. 去除洗滌液，加入稀釋的熒光標(biāo)記的二抗作用60分鐘。
J. 回收熒光標(biāo)記的二抗，用洗滌液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。
K. 滴一滴本試劑盒提供的抗熒光淬滅封片液于載玻片上，蓋上蓋玻片，盡量避免氣泡。
L. 如果一抗選用適當(dāng)，在熒光顯微鏡下可以觀察到綠色的熒光。
4. 對(duì)于組織切片：
A. 對(duì)于石蠟切片，需先完成脫蠟、水化和抗原修復(fù)。對(duì)于冰凍切片可以直接按照下面的步驟操作。
B. 用固定液固定10分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間(可4℃過(guò)夜)。固定及后續(xù)的操作可以用碧云天的染色缸和染色架或郵寄夾進(jìn)行操作。
C. 去固定液，用洗滌液洗3次，每次3-5分鐘，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。
D. 用封閉液封閉60分鐘，可以在搖床上輕輕搖動(dòng)。
E. 去封閉液，用稀釋的特定一抗作用60分鐘，可以在搖床上輕輕搖動(dòng)。為增強(qiáng)與一抗的結(jié)合，可以4℃作用過(guò)夜。
F. 去除一抗，用洗滌液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。每次洗滌時(shí)都可以在搖床上輕輕搖動(dòng)。
G. 去除洗滌液，加入1毫升稀釋好的熒光標(biāo)記的二抗作用60分鐘，可以在搖床上輕輕搖動(dòng)。
H. 回收熒光標(biāo)記的二抗，用洗滌液洗滌3-5次，每次3-5分鐘。每次洗滌時(shí)都可以在搖床上輕輕搖動(dòng)。
I. 滴一滴本試劑盒提供的抗熒光淬滅封片液于載玻片上，蓋上蓋玻片，盡量避免氣泡。
J. 如果一抗選用適當(dāng)，在熒光顯微鏡下可以觀察到綠色的熒光。