產品簡介：

Ø DEAE-Dextran細胞轉染試劑盒(DEAE-Dextran Transfection Kit)是一種適合于把DNA轉染到培養的真核細胞中的轉染試劑盒。
Ø 關于DEAE-dextran的細胞轉染方法早在1968年就有相關論文發表。DEAE-dextran可以促使DNA結合到細胞膜上，然后通過內吞作用(endocytosis)進入細胞。基于DEAE-dextran的細胞轉染方法適用于瞬時轉染(transient tranfection)，但不適用于篩選穩定表達細胞株。DEAE-dextran在較高濃度作用較長時間會對細胞產生一定毒性。
Ø 目前基于DEAE-dextran的細胞轉染方法有兩種，一種方法為把DNA和DEAE--dextran混合后加入到細胞中，另一種方法為先用DEAE--dextran預處理細胞，然后再加入DNA。后一種方法是在前一種方法的基礎上經過改進而產生的，對于一些細胞包括Hela、COS、NIH3T3和KB細胞等，后一種方法可以增加細胞對DNA的攝入量，顯著改善轉染效果。氯喹的加入可以抑制溶酶體對外源DNA的降解，從而提高轉染效率。但對于具體的細胞、具體的培養條件，如需獲得更加理想的轉染效率，必須自行摸索上述各種轉染方法，找出優化的轉染方法。
Ø 基于DEAE-dextran的細胞轉染方法不僅可以轉染貼壁細胞，也可以轉染懸浮細胞。
Ø 轉染效率可以通過轉染表達EGFP或其它熒光蛋白的質粒進行快速鑒定。
Ø 對于六孔板而言，一個包裝的本轉染試劑如使用常規方法可以轉染2500個孔，如使用預處理方法可以轉染200個孔。





包裝清單：

產品編號 產品名稱 包裝
C0511-1 DEAE-Dextran溶液 20ml
C0511-2 10XPBS 20ml
C0511-3 氯喹溶液 3.5ml
— 說明書 1份





保存條件：

4℃保存，一年有效。



注意事項：

Ø 使用高純度的DNA或RNA有助于獲得較高的轉染效率。對于質粒，可以使用碧云天生產的質粒大量抽提試劑盒(D0026)進行抽提，以保證獲得較高的轉染效率。
Ø 轉染前細胞必須處于良好的生長狀態。
Ø 試劑盒中各試劑均經過無菌處理，可以直接使用。在細胞轉染過程中要嚴格注意無菌操作。
Ø 需自備用于洗滌的PBS或HBSS，以及用于稀釋10XPBS的無菌水。
Ø 稀釋或配制DEAE-Dextran溶液或DNA的1XPBS可以用試劑盒中提供的10XPBS稀釋。
Ø 氯喹溶液對人體有害，請注意適當防護。

Ø 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。



使用說明：


1. DEAE-Dextran常規轉染方法
a. 細胞培養(以六孔板為例，其它培養板或培養皿參考六孔板進行操作)：
在轉染前一天(20-24小時)把約20-60萬細胞(具體的細胞數量據細胞大小和細胞生長速度而定)培養到六孔板內，使第二天細胞能達到約40-70%滿。
b. 混勻試劑盒中各試劑。取適量10XPBS，稀釋為1XPBS。37℃預熱自備洗滌液(PBS或HBSS)。
c. 參考下表，對于待轉染的六孔板中一個孔的細胞，依次加入適量1XPBS，2微克DNA，以及8微升DEAE-Dextran溶液，使最終體積為170微升，用槍輕輕吹打混勻。注意：不宜Vortex或離心。
One well for 6-well plate
One well for 24-well plate
60mm dish
100mm dish

1XPBS
(162-x)微升
(40-x)微升
(325-x)微升
(540-x)微升

DNA
x微升(2微克)
x微升(0.5微克)
x微升(4微克)
x微升(7微克)

DEAE-Dextran溶液
8微升
2微升
17微升
28微升

總體積
170微升
42微升
342微升
568微升

均勻滴加到細胞表面，細胞培養箱內孵育30分鐘，孵育期間經常搖動培養板以保持所有細胞濕潤
添加細胞培養液量
1.7毫升
0.4毫升
3.5毫升
6毫升

添加氯喹溶液量(選做)
17微升
4微升
35微升
60微升

細胞培養箱內培養不超過2.5小時或出現細胞毒性前更換培養液，繼續培養48-72小時

注1：對于六孔板中一個孔的細胞，DNA用量可以在1-3微克的范圍內進行適當調節。最佳的轉染條件，因具體的細胞和培養條件而定，可以在上述推薦范圍內自行優化轉染條件。
注2：對于其它培養板或培養器皿，各種試劑的用量可以大致按照細胞培養面積按比例進行換算。
d. 去除細胞培養液，用PBS洗滌細胞2-3次，吸除殘留液體。
e. 把170微升DEAE-Dextran-DNA混合物均勻滴加到細胞表面。
f. 細胞培養箱內孵育30分鐘，孵育期間經常搖動培養板以保持所有細胞濕潤。
g. 參考上表，每孔緩慢加入1.7毫升細胞培養液(約DEAE-Dextran-DNA混合物體積的10倍)。
h. 選做：參考上表，每孔加入17微升氯喹溶液。氯喹溶液可以和上一步驟中1.7毫升細胞培養液預先混合后一起加入。
i. 細胞培養箱內培養不超過2.5小時或在出現明顯的細胞毒性前，更換新鮮細胞培養液繼續培養。
j. 通常轉染后48-72小時可以檢測轉染效果。
2. DEAE-Dextran預處理轉染方法
a. 細胞培養(以六孔板為例，其它培養板或培養皿參考六孔板進行操作)：
在轉染前一天(20-24小時)把約20-60萬細胞(具體的細胞數量據細胞大小和細胞生長速度而定)培養到六孔板內，使第二天細胞能達到約40-70%滿。
b. 混勻試劑盒中各試劑。取適量10XPBS，稀釋為1XPBS。37℃預熱自備洗滌液(PBS或HBSS)。
c. 參考下表，取適量試劑盒中提供的DEAE-Dextran溶液用1XPBS稀釋10倍。對于六孔板的一個孔，取0.1毫升DEAE-Dextran溶液，加入0.9毫升1XPBS，混勻。
d. 參考下表，取適量DNA用1XPBS稀釋。對于六孔板的一個孔，取2微克DNA，加入適量1XPBS使最終體積為162微升。

One well for 6-well plate
One well for 24-well plate
60mm dish
100mm dish

1XPBS
0.9毫升
225微升
1.8毫升
3.6毫升

DEAE-Dextran溶液
0.1毫升
25微升
0.2毫升
0.4毫升

稀釋的DEAE-Dextran溶液
1毫升
250微升
2毫升
4毫升

DNA
x微升(2微克)
x微升(0.5微克)
x微升(4微克)
x微升(7微克)

1XPBS
(162-x)微升
(40-x)微升
(325-x)微升
(540-x)微升

稀釋的DNA
162微升
40微升
325微升
540微升

去除細胞培養液，用PBS或HBSS洗滌兩次，每次3-5分鐘
加入稀釋的DEAE-Dextran溶液，室溫孵育9分鐘，洗滌兩次
把稀釋的DNA均勻滴加到細胞表面，孵育30分鐘，孵育期間經常搖動培養板以保持所有細胞濕潤
添加細胞培養液量
1.7毫升
0.4毫升
3.5毫升
6毫升

添加氯喹溶液量(選做)
17微升
4微升
35微升
60微升

細胞培養箱內培養不超過2.5小時或出現細胞毒性前更換培養液，繼續培養48-72小時

注1：對于六孔板中一個孔的細胞，DNA用量可以在1-3微克的范圍內進行適當調節。最佳的轉染條件，因具體的細胞和培養條件而定，可以在上述推薦范圍內自行優化轉染條件。
注2：對于其它培養板或培養器皿，各種試劑的用量可以大致按照細胞培養面積按比例進行換算。
e. 去除細胞培養液，用PBS或HBSS室溫洗滌兩次，每次3-5分鐘。
f. 去除洗滌液，加入1毫升經10倍稀釋的DEAE-Dextran溶液，室溫孵育9分鐘。
g. 去除稀釋的DEAE-Dextran溶液，用PBS或HBSS輕輕洗滌細胞兩次。洗滌時要特別小心，經DEAE-Dextran預處理后貼壁細胞容易脫落。
h. 去除洗滌液，把步驟2d準備的162微升含有2微克DNA的1XPBS溶液，均勻滴加到細胞表面。
i. 細胞培養箱內孵育30分鐘，孵育期間經常搖動培養板以保持所有細胞濕潤。
j. 參考上表，每孔緩慢加入1.7毫升細胞培養液(約稀釋的DNA體積的10倍)。
k. 選做：參考上表，每孔加入17微升氯喹溶液。氯喹溶液可以和上一步驟中1.7毫升細胞培養液預先混合后一起加入。加入氯喹后，在4小時內或出現明顯的細胞毒性前必須更換新鮮細胞培養液。氯喹的具體處理時間，對于不同的細胞需根據實驗操作結果進行確認。
l. 通常轉染后48-72小時可以檢測轉染效果。

常見問題：
1. 轉染效率低或幾乎沒有轉染。
很多時候是由于過多細胞死亡導致。可以考慮適當減少DEAE-Dextran溶液的用量，或適當縮短細胞暴露于DEAE-Dextran的時間；減少氯喹溶液的處理時間；一些對DEAE-Dextran特別敏感的細胞，在轉染時可以適當增加細胞密度。優化DNA的用量通常可以獲得較高的轉染效率。另外，確保DNA的純度，例如確保A260/A280>1.8，可以改善轉染效率。
2. 轉染效率不穩定。
如果有支原體污染通常會導致轉染效率不穩定，此時只需更換沒有污染的細胞就可以了。另外，細胞生長狀態不佳，也容易導致轉染效率顯著下降。