產品簡介：

Ø NF-κB激活－核轉運檢測試劑盒(NF-κB Activation，Nuclear Translocation Assay Kit)是通過免疫熒光染色檢測NF-κB的主要亞基p65是否轉運到細胞核內從而確認NF-κB是否被激活的檢測試劑盒。
Ø 本試劑盒提供了固定液、洗滌液、封閉液、一抗、熒光標記二抗、細胞核熒光染色液、封片液，使用時不必再配制其它任何溶液。提供了細胞核熒光染色液，可以把細胞核染成藍色熒光，這樣可以清楚地判斷NF-κB是否被轉運到細胞核內而被激活。
Ø NF-κB是一種常見的轉錄因子，可以被炎癥因子、生長因子或趨化因子等激活。常見的炎癥因子(包括Interleukin-1β和TNF-α等)都可以激活NF-κB。NF-κB由兩類亞基形成同源或異源二聚體。一類亞基包括p65(也稱RelA)、RelB和C-Rel；另一類亞基包括p50和p52。最常見的NF-κB亞基組成形式為p65/p50或p65/p65。
Ø NF-κB未被激活時和IκB-α形成一個復合物，分布在細胞漿中。在炎癥因子、生長因子或趨化因子等可以激活NF-κB的刺激存在的情況下，IκB-α會在Ser32和Ser36被磷酸化，隨后被泛素-蛋白酶體途徑降解。NF-κB和IκB-α解聚后，其核定位序列被暴露，從而被轉運到細胞核內促進NF-κB依賴的基因轉錄。通過免疫染色檢測NF-κB的主要亞基p65是否被轉移到細胞核內，就可以判斷NF-κB是否被激活。
Ø 本NF-κB激活－核轉運檢測試劑盒僅染色p65，不染色RelB、C-Rel、p50和p52。
Ø 使用本試劑盒染色后NF-κB呈紅色熒光，細胞核呈藍色熒光。
Ø 如果檢測組織切片或6孔板內的細胞樣品，至少可以檢測50個樣品，如果檢測96孔板內的樣品，至少可以檢測250-500個樣品。





包裝清單：

產品編號 產品名稱 包裝
SN368-1
固定液
50ml

SN368-2
洗滌液
250ml×2

SN368-3
免疫熒光染色封閉液
50ml

SN368-4
NF-κB p65抗體
6ml

SN368-5
抗兔Cy3
6ml

SN368-6
細胞核染色液(DAPI)
50ml

SN368-7
抗熒光淬滅封片液
10ml

— 說明書 1份





保存條件：

細胞核染色液-20℃保存，其余試劑均4℃保存，一年有效。其中抗兔Cy3和細胞核染色液需避光保存。




注意事項：

Ø 免疫熒光染色時，請注意回收使用過的NF-κB p65抗體和抗兔Cy3。回收后至少可以重復使用10次。
Ø 需使用可以觀察紅色熒光和藍色熒光的熒光顯微鏡。
Ø 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。



使用說明：


1. 對于貼壁細胞：
a. 吸除培養液，用PBS洗滌1次。
b. 加入固定液，固定5-15分鐘。固定液的用量充分蓋住樣品即可，對于6孔板中的樣品，通常加入1ml固定液。
c. 吸除固定液，用洗滌液洗滌3次，每次3-5分鐘。每次洗滌時須盡量吸盡殘余液體，同時要保持樣品表面有些濕潤，不能干掉，最后一遍洗滌完時吸盡洗滌液。
d. 加入免疫染色封閉液，室溫封閉1小時。免疫染色封閉液的用量充分蓋住樣品即可，對于6孔板中的樣品，通常加入1ml免疫染色封閉液。
e. 吸除免疫染色封閉液，加入NF-κB p65抗體，室溫孵育1小時或4℃孵育過夜。
f. 小心吸出NF-κB p65抗體到適當的容器內，4℃保存，留做下次使用。
g. 洗滌液洗滌3次，每次5-10分鐘。每次洗滌時須盡量吸盡殘余液體，同時要保持樣品表面有些濕潤，不能干掉，最后一遍洗滌完時吸盡洗滌液。
h. 加入抗兔Cy3，室溫孵育1小時。抗兔Cy3的用量充分蓋住樣品即可，對于6孔板中的樣品，通常加入1ml抗兔Cy3。
i. 小心吸出抗兔Cy3到適當的容器內，4℃保存，留做下次使用。
j. 洗滌液洗滌2次，每次5-10分鐘。每次洗滌時須盡量吸盡殘余液體，同時要保持樣品表面有些濕潤，不能干掉，最后一遍洗滌完時吸盡洗滌液。
k. 加入細胞核染色液(DAPI)，室溫染色5分鐘左右。細胞核染色液的用量充分蓋住樣品即可，對于6孔板中的樣品，通常加入1ml細胞核染色液。
l. 吸除細胞核染色液，用洗滌液洗滌3次，每次3-5分鐘。每次洗滌時須盡量吸盡殘余液體，同時要保持樣品表面有些濕潤，不能干掉，最后一遍洗滌完時吸盡洗滌液。
m. 滴加適當量的抗熒光淬滅封片液，蓋玻片封片后熒光顯微鏡下觀察。NF-κB的染色為紅色熒光，細胞核的DAPI染色為藍色熒光。
2. 對于懸浮細胞：
a. 離心收集細胞，PBS洗滌1次。吸盡PBS后把細胞適當彈散。
b. 加入固定液，輕輕懸浮細胞，固定5-15分鐘。
c. 離心，去除固定液。
d. 加入洗滌液洗滌1次。
e. 取少許洗滌液重懸細胞，滴加到蓋玻片或載玻片上，做成涂片。充分晾干后繼續后續操作。
f. 洗滌液洗滌2次，每次5分鐘。每次洗滌時須盡量吸盡殘余液體，同時要保持樣品表面有些濕潤，不能干掉，最后一遍洗滌完時吸盡洗滌液。
g. 轉1.d。后續步驟同1.d起的步驟。

3. 對于組織切片：
a. 對于石蠟切片先進行常規的脫蠟和水化處理，對于冷凍切片可以直接進行后續步驟。
b. 轉1.b。后續步驟同1.b起的步驟。