產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Ø 化學(xué)發(fā)光法生物素檢測(cè)試劑盒(Chemiluminescent Biotin-labeled Nucleic Acid Detection Kit)是一種通過(guò)Streptavidin-HRP及后續(xù)的ECL試劑來(lái)實(shí)現(xiàn)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)Biotin標(biāo)記核酸的檢測(cè)試劑盒。適用于Southern blot、Northern blot、ribonuclease protection assay (RPA)或EMSA等實(shí)驗(yàn)中，采用生物素標(biāo)記的DNA或RNA探針時(shí)的檢測(cè)。本試劑盒不適用于生物素標(biāo)記蛋白的檢測(cè)。
Ø 本試劑盒同時(shí)還提供了封閉液、洗滌液等檢測(cè)時(shí)所需的配套試劑。
Ø 本試劑盒采用了高質(zhì)量的Streptavidin-HRP Conjugate，HRP和Streptavidin共價(jià)交聯(lián)的比例大于3，這樣比采用Streptavidin和Biotin-HRP conjugate兩種試劑進(jìn)行檢測(cè)要更方便，并且靈敏度更高。
Ø 采用了非特異性結(jié)合比avidin更低的strepatavidin，使檢測(cè)結(jié)果背景更低靈敏度更高。
Ø 本試劑盒沒(méi)有提供生物素探針標(biāo)記相關(guān)的試劑，生物素標(biāo)記的DNA探針或EMSA探針的制備可以相應(yīng)地使用碧云天生產(chǎn)的生物素3''末端DNA標(biāo)記試劑盒(D3106)或EMSA探針生物素標(biāo)記試劑盒(GS008)。
Ø 本試劑盒可以用于檢測(cè)至少10塊10x10cm有生物素標(biāo)記EMSA探針的膜，即共1000cm2。


包裝清單：

產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝

D3308-1
ECL Reagent A
55毫升

D3308-2
ECL Reagent B
55毫升

D3308-3
Streptavidin-HRP Conjugate
60微升

D3308-4
封閉液
380毫升

D3308-5
洗滌液(5X)
250毫升

D3308-6
檢測(cè)平衡液
250毫升

－
說(shuō)明書
1份





保存條件：

4℃保存。如果短時(shí)間內(nèi)不用，建議把ECL Reagent A和B在-20℃保存。



注意事項(xiàng)：

Ø 需自備帶正電荷尼龍膜或硝酸纖維素膜(NC膜)，以及凝膠電泳時(shí)所需的相關(guān)試劑。硝酸纖維素膜(FFN06/FFN09)可以向碧云天訂購(gòu)。
Ø 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。


使用說(shuō)明：

1. 在使用Biotin標(biāo)記探針的情況下，完成Southern、Northern雜交及后續(xù)洗滌后，或RPA的轉(zhuǎn)膜和交聯(lián)后，或EMSA的轉(zhuǎn)膜和交聯(lián)后，可以使用本試劑盒開(kāi)始檢測(cè)。下面的檢測(cè)過(guò)程中溶液的用量是用于一片10x10cm膜的量。如果膜較大或較小，各溶液的用量可以按比例放大或縮小。
2. 37-50℃水浴溶解封閉液和洗滌液。
注意：封閉液和洗滌液必須完全溶解后方可使用，封閉液和洗滌液可以在室溫至50℃之間使用，但必須確保這兩種溶液中均無(wú)沉淀產(chǎn)生，在冬天需特別注意。
3. 取一合適的容器加入15ml封閉液，再放入交聯(lián)過(guò)的含有樣品的尼龍膜。在側(cè)擺搖床或水平搖床上緩慢搖動(dòng)15分鐘。
4. 取5微升Streptavidin-HRP Conjugate加入到15ml封閉液中(1:3000稀釋)，混勻備用。
5. 去除封閉液，加入上一步中配制的15ml含有Streptavidin-HRP Conjugate的封閉液。在側(cè)擺搖床或水平搖床上緩慢搖動(dòng)15分鐘。
6. 取25ml 洗滌液(5X)，加入100ml重蒸水或MilliQ級(jí)純水，混勻配制成125ml洗滌液。
7. 將尼龍膜轉(zhuǎn)移至另一裝有15-20ml洗滌液的容器內(nèi)，漂洗1分鐘。
8. 去除洗滌液，加入15-20ml洗滌液，在側(cè)擺搖床或水平搖床緩慢上洗滌5分鐘。
9. 重復(fù)步驟8三次(共洗滌四次)，每次洗滌時(shí)間均約為5分鐘。
10. 將尼龍膜轉(zhuǎn)移至另一裝有20-25ml檢測(cè)平衡液的容器內(nèi)，在側(cè)擺搖床或水平搖床上緩慢搖動(dòng)5分鐘。
11. 取5ml ECL Reagent A和5ml ECL Reagent B混勻，配制成ECL Reagent工作液。注意：ECL Reagent工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。
說(shuō)明：從本步驟起操作方法和注意事項(xiàng)同Western實(shí)驗(yàn)的ECL檢測(cè)。
12. 取出尼龍膜，用吸水紙吸去過(guò)多液體。立即將膜的樣品面向上，放置到處于水平桌面上的潔凈容器內(nèi)或保鮮膜上。
13. 在尼龍膜的表面小心加上步驟11配制好的共10ml ECL Reagent工作液，使工作液完全覆蓋尼龍膜。室溫放置2-3分鐘。
14. 取出尼龍膜，用吸水紙吸去過(guò)多液體。將尼龍膜放在兩片保鮮膜或其它適當(dāng)?shù)耐腹獗∧ぶ虚g，并固定于壓片暗盒(也稱片夾)內(nèi)。
15. 用X光片壓片1-5分鐘。可以先壓片1分鐘，立即顯影定影，然后根據(jù)結(jié)果再調(diào)整壓片時(shí)間；也可以直接分別壓片30秒、1、3、5分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間，然后一起顯影定影觀察結(jié)果。

常見(jiàn)問(wèn)題：
1. 背景較高。
可能是由于封閉液或洗滌液中出現(xiàn)沉淀或混濁。解決方法是參考使用說(shuō)明，加熱封閉液和洗滌液使封閉液和洗滌液完全溶解。
2. 出現(xiàn)斑點(diǎn)狀背景。
可能是由于過(guò)長(zhǎng)時(shí)間存放導(dǎo)致Streptavidin-HRP Conjugate中出現(xiàn)沉淀，解決方法是12000-14000g離心1分鐘再吸取近液面的Streptavidin-HRP Conjugate。轉(zhuǎn)膜時(shí)有氣泡也會(huì)導(dǎo)致斑點(diǎn)狀背景產(chǎn)生，解決方法是轉(zhuǎn)膜時(shí)膠、膜、濾紙之間確保沒(méi)有氣泡。
3. 沒(méi)有條帶或信號(hào)很弱。
A. 探針標(biāo)記效率太低，解決方法是檢測(cè)探針標(biāo)記效率，確保探針的標(biāo)記效率較高。
B. 探針用量不足或樣品量不足，解決方法是加大探針用量或加大樣品用量。
C. 樣品中待檢測(cè)的核酸降解，解決方法是檢測(cè)待檢測(cè)的核酸樣品是否出現(xiàn)降解，如降解則須制備新的樣品。
D. 轉(zhuǎn)膜效果不佳，解決方法是檢查轉(zhuǎn)膜的方法和步驟，最好使用預(yù)染的標(biāo)準(zhǔn)品作為轉(zhuǎn)膜的對(duì)照。
E. 選擇了不適當(dāng)?shù)哪ぃ�盡管不少情況下硝酸纖維素膜也可以完成檢測(cè)，請(qǐng)優(yōu)先選擇帶正電荷的尼龍膜。
F. 檢測(cè)過(guò)程中膜干掉了，解決方法是確保檢測(cè)過(guò)程中膜可以被液體覆蓋或始終保持濕潤(rùn)。
G. 沒(méi)有交聯(lián)或交聯(lián)效果不佳，解決方法是進(jìn)行適當(dāng)?shù)慕宦?lián)，如果交聯(lián)效果不佳則須檢測(cè)交聯(lián)的效率。
H. 洗滌液(5X)沒(méi)有稀釋就直接使用，請(qǐng)把洗滌液(5X)稀釋至1X后再使用。
I. X光片曝光時(shí)間不足，解決方法是適當(dāng)延長(zhǎng)曝光時(shí)間。